2016 Fiscal Year Annual Research Report
Study on development and application of histochemically stainable probe using fluorescent pigment dye
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26460166
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| Research Institution | Hiroshima International University |
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Principal Investigator |
大坪 忠宗 広島国際大学, 薬学部, 准教授 (30365879)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | ライブイメージング / シアリダーゼ / シアル酸 / 蛍光色素 / 組織染色 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
固体発光性顔料色素である 2-benzothiazol-2-yl-phenol (BTP) を aglycone とする glycosidase 基質開発の一環として、特に sialic acid 誘導体を中心に研究を継続した。
2-benzothiazol-2-yl-4-bromo-phenol (BTP3) の sialic acid 付加体を用いたライブ蛍光イメージングに於いて、sialidase によって遊離した蛍光色素が加水分解地点から移動（拡散）することによって、イメージング画像の解像度が粗くなることが問題となっていた。このため、昨年度来 BTP3 を別の BTP 誘導体に置き換えて拡散性を抑えて解像度の向上を目指していた。遷移金属を用いるカップリング反応によって BTP3 の臭素原子を長さの異なる炭化水素鎖に置き換えた誘導体は、合成の簡便さ、定着性の向上という点では目的を十分に達成できた。
しかし、alkenyl-基、alkynyl-基を導入した誘導体は光ブリーチングに対する耐性が低いことが予想され、より向上した光耐性の獲得と同時に高い輝度を両立した誘導体の開発を行った。種々検討した結果、定着性の向上に長鎖 alkyl-基を、また、輝度の改善に臭素原子を導入した誘導体は、高い定着性、明るい輝度、構造的に高い光耐性を併せ持ちながら、従来型の BTP3 の誘導体と類似した励起波長・蛍光波長を持つことが明らかとなった。
この色素を aglycone とするsialic acid 誘導体を用いて、インフルエンザＡ型ウイルスを感染させた MDCK 細胞を用いてインフルエンザウイルスのライブイメージングを行ったところ、alkyl-基の炭素数に応じて定着性が向上すること、また、炭素数12個程度では感度が低くなることが明らかとなった。
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[Journal Article] High-Efficiency Capture of Drug Resistant-Influenza Virus by Live Imaging of Sialidase Activity2016
Author(s)
Yuuki Kurebayashi, Tadanobu Takahashi, Chihiro Tamoto, Keiji Sahara, Tadamune Otsubo, Tatsuya Yokozawa, Nona Shibahara, Hirohisa Wada, Akira Minami, Kiyoshi Ikeda, Takashi Suzuki
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Journal Title
PLOS ONE
Volume: 5
Pages: e0156400
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Substrate specificity of equine and human influenza A virus sialidase to molecular species2016
Author(s)
Tadanobu Takahashi, Saori Unuma, Sawako Kawagishi, Yuuki Kurebayashi, Maiko Takano, Hiroki Yoshino, Akira Minami, Takashi Yamanaka, Tadamune Otsubo, Kiyoshi Ikeda, Takashi Suzuki
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Journal Title
Biological & Pharmaceutical Bulletin
Volume: 10
Pages: 1728-1733
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] High-efficiency capture of drug resistant-influenza virus by live imaging of sialidase activity2016
Author(s)
Yuuki Kurebayashi, Tadanobu Takahashi, Chihiro Tamoto, Keiji Sahara, Tadamune Otsubo, Tatsuya Yokozawa, Nona Shibahara, Hirohisa Wada, Akira Minami, Kiyoshi Ikeda, Takashi Suzuki
Organizer
Sialoglyco 2016
Place of Presentation
The Fess Parker - A Doubletree
Year and Date
2016-11-14 – 2016-11-17
Int'l Joint Research
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