2014 Fiscal Year Research-status Report
安定化ヘリカルペプチドを用いた標的タンパク質分解誘導剤の創製
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26460169
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| Research Institution | National Institute of Health Sciences |
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Principal Investigator |
出水 庸介 国立医薬品食品衛生研究所, 有機化学部, 室長 (90389180)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | ペプチド / タンパク質分解誘導剤 / プロテインノックダウン / 二次構造制御 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【目的】標的タンパク質の表面に結合できるペプチドをリガンドとして用いた分解誘導剤の開発を行うことを目的とした。モデル受容体として、ユビキチン-プロテアソーム系で分解できるエストロゲン受容体（ER）を標的とした分解誘導ペプチドの開発を行った。すなわち、cIAPリガンド（ベスタチン：BS）とER阻害ペプチド（PERM-1）をスペーサーで繋いだ分子を合成し、ERの分解を評価した。
【方法】 強いER結合親和性を持つPERM-1にBSを繋いだ分子（BS-PERM-1）を合成した。ヒト乳癌細胞由来MCF-7を用いてBS-PERM-1のER分解能をウェスタンブロッティングにより評価した。
【結果・考察】BS-PERM-1のER分解能を評価した結果、BS-PERM-1はERαを分解していないこと、さらに、PERM-1、BS-PERM-1ともに細胞死を誘導していないことが明らかとなった。その原因として、これらのペプチドが細胞膜を通過していない可能性が考えられた。そこで、PERM-1の膜透過性を評価すること、さらに膜透過フラグメント（R7）を導入することで膜透過性を高めることを目的として、ペプチドFAM-PERM-1-R7を合成した。それらの膜透過能の評価を行った結果、FAM-PERM-1 は10μMにおいても細胞膜を透過できないこと、一方でR7修飾したFAM-PERM-1-R7は0.1μMでも細胞内へ導入されることを明らかとした。現在、PERM-1-R7のER阻害活性評価、PERM-1-R7にBSを導入した分解誘導ペプチドを合成中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年は、ペプチドの効率的合成法（マイクロ波を利用した迅速合成）の確立と細胞評価系の構築を行った。また、目的ペプチドを効率的に細胞内へと導入する手法を確立した。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度以降は下記の4段階に分けて研究を遂行する。
1.合成したペプチドのER転写活性化阻害能の評価（エストロゲン刺激によるpS2の発現上昇を指標にペプチドの阻害効果を評価）
2.ウェスタンブロッティングによるER分解能の評価
3.ペプチドの構造最適化
4.他の疾患関連タンパク質（アンドロゲン受容体、ビタミンD受容体、Mdm2受容体など）への応用
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| Causes of Carryover |
エストロゲン受容体親和性測定キットの購入を次年度に繰り越したため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
親和性測定キットの購入を行う。
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Research Products
(49 results)
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[Journal Article] Design, synthesis and anti-HIV-1 activity of 1-aromatic methyl-substituted 3-(3,5-dimethylbenzyl)uracil and N-3,5-dimethylbenzyl-substituted urea derivatives2015
Author(s)
N. Sakakibara,* M. Baba, M. Okamoto, M. Toyama, Y. Demizu, T. Misawa, M. Kurihara, K. Irie, Y. Kato, T. Maruyama
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Journal Title
Antiviral Chem. Chemother.
Volume: 24
Pages: 3-18
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Conformations of LD-peptides containing equal amounts of L-amino acids, D-amino acids, and achiral α,α-disubstitued amino acids2014
Author(s)
Demizu, Y., Misawa, T., Yamashita, H., Doi, M., Sato, Y., Tanaka, M., Kurihara
Organizer
33rd European Peptide Symposium
Place of Presentation
ブルガリア
Year and Date
2014-08-31 – 2014-09-05
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[Presentation] Helical secondary structures of peptides having chiral cyclic amino acid with two azido functional groups2014
Author(s)
Tanaka, M., Takazaki, H., Kawabe, N., Doi, M., Demizu, Y., Kurihara, M., Suemune, H., Oba, M.
Organizer
33rd European Peptide Symposium
Place of Presentation
ブルガリア
Year and Date
2014-08-31 – 2014-09-05
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