2014 Fiscal Year Research-status Report
免疫グロブリン製剤に含まれる凝集体の特性と安全性に関する研究
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26460249
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| Research Institution | National Institute of Health Sciences |
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Principal Investigator |
石井 明子 国立医薬品食品衛生研究所, 生物薬品部, 室長 (50291117)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
原園 景 国立医薬品食品衛生研究所, 生物薬品部, 主任研究官 (20280753)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 免疫グロブリン / 凝集体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
各種免疫グロブリン製剤を50mg/mLに調製し、定量的レーザー回折により凝集体含量を測定した。凝集体形成抑制する処理を行っていない製剤では、1μm以上の凝集体は20～30μg/mL程度観測された。陰イオン交換クロマト処理した製剤、PEG処理＋陰イオン交換クロマト処理した製剤、ペプシン処理した製剤では、1μm以上の凝集体はほとんど観測されなかった。それに対して、pH 4処理した製剤、スルホ化した製剤では、それぞれ約5μg/mL、25μg/mL程度観測された。サイズ排除クロマトグラフィーにて多量体含量を調べたところ、PEG処理＋陰イオン交換クロマト処理した製剤を除き、比較的多くの二量体が存在していることが確認された。プロテオミクスの手法により含まれるタンパク質を同定したところ、IgG1、2、3、4の重鎖、並びに軽鎖（カッパー、ラムダ）が確認された。製剤によりアルブミン、IgA1重鎖が検出されるものもあったが、凝集体含量との関連は不明であった。現在、LC/MSにより各サブクラスの存在比や抗体Fc糖鎖の糖鎖プロファイルを比較すべく、分析条件の最適化を行っている所である。以上の結果から、1μm以上の凝集体形成に関しては、陰イオン交換クロマト処理が効果的に働いており、ペプシン処理及びスルホ化処理は効果が弱いこと、多量体の形成に関してはPEG処理が有効に作用していることが推測された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の予定どおり、製造方法の異なる各免疫グロブリン製剤中の凝集体含量、及び、特性解析を実施することができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
製剤間での抗体サブクラスの含量比、及びサブクラス毎の糖鎖プロファイルの比較を行う。
超遠心にて凝集体を分離し、可溶性画分と凝集体中の成分の特性の比較を行う。陰イオン交換クロマト処理が有効に働いていることが推測されたことから、可溶性画分と凝集体での等電点電気泳動によるプロファイルの比較を行う。
各種の凝集体抑制処理をした製剤について、熱、撹拌、pH変化等などのストレスによる凝集体のできやすさの評価を行い、製法との凝集体形成に対する効果を明らかにする。
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| Causes of Carryover |
免疫グロブリン製剤の安定を評価したところ、購入後、長期に保存が可能であり、予定していた追加購入が不要となった。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
免疫グロブリン製剤の安定性を確認し、製剤間の比較を行う際には追加購入する。
LC/MS分析に必要な資材を購入する。
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