2016 Fiscal Year Annual Research Report
Molecular bases for intracellular trafficking and functional signalosome formation mediated through histamine H3 receptor
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26460331
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
助川 淳 東北大学, 医学系研究科, 非常勤講師 (30187687)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柳澤 輝行 東北福祉大学, 健康科学部, 教授 (90133941)
佐藤 岳哉 東北大学, 医学系研究科, 准教授 (10312696)
斎藤 将樹 東北大学, 医学系研究科, 助教 (50400271)
倉増 敦朗 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90302091) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | Gタンパク質共役型受容体 / ヒスタミンH3受容体 / シグナロソーム / Rab8 / 細胞内輸送 / サイクリックAMP |
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| Outline of Annual Research Achievements |
前年度までに、ヒスタミンH3受容体 (H3R) のカルボキシル末端に含まれるヘリックス8領域に、低分子量Gタンパク質Rab8が直接結合することを見出した。また、H3Rの細胞膜局在は野生型Rab8-WTおよび活性化型変異体Rab8-Q67Lの過剰発現によって減少することを見出した。本年度は、H3Rを安定発現したHEK293細胞 (H3R/HEK293細胞) を作製し、H3Rの細胞内分布における内因性Rab8の役割について解析した。Rab8AおよびRab8Bのshort hairpin RNA (shRNA) をそれぞれ作製し、内因性Rab8AとRab8Bを共ノックダウン (KD) した。細胞表面H3R量をCell ELISA法にて測定したところ、Rab8-KDによって増加した。H3Rは三量体Gタンパク質Giと共役する。申請者らは、H3R/HEK293細胞をH3Rアゴニストimmethridineで刺激すると、アデニル酸シクラーゼ (AC) を介したサイクリックAMP (cAMP) 産生が減少することを、AlphaScreen法を用いて見出した。また、Rab8によって細胞表面H3R量が減少することは、H3R-Giシグナルの減弱に繋がることが考えられるが、これは今後の検討課題である。一方、一般的にRab8はゴルジ体から細胞膜への小胞輸送に関わるため、Rab8-KDによる細胞表面H3R量の減少は、リサイクリング阻害薬monensinによって模倣されることが予想される。しかし、monensin処置によってH3Rは細胞内に凝集しかつ細胞表面量が時間依存的に減少することを、それぞれ免疫染色法およびCell ELISA法にて見出した。すなわち、一般的に考えられているRab8の小胞輸送機構とは異なる機構によって、Rab8がH3Rの細胞内局在を制御することが示された。
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[Journal Article] Mitochonic Acid 5 Binds Mitochondria and Ameliorates Renal Tubular and Cardiac Myocyte Damage2016
Author(s)
Suzuki T, Yamaguchi H, Kikusato M, Hashizume O, Nagatoishi S, Matsuo A, Sato T, Kudo T, Matsuhashi T, Murayama K, Ohba Y, Watanabe S, Kanno S, Minaki D, Saigusa D, Shinbo H, Mori N, Yuri A, Yokoro M, Mishima E, Shima H, Akiyama Y, Takeuchi Y, Yanagisawa T, Bonventre JV, Ito S, Osaka H, Hayashi K, Abe T ほか12名
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Journal Title
Journal of the American Society of Nephrology
Volume: 27
Pages: 1925-32
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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