2014 Fiscal Year Research-status Report
CD169陽性マクロファージによる炎症性腸疾患増悪機序の解明
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26460401
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| Research Institution | Tokyo University of Pharmacy and Life Science |
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Principal Investigator |
浅野 謙一 東京薬科大学, 生命科学部, 准教授 (10513400)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | CD169 / マクロファージ / 炎症性腸疾患 / CCL8 / 抗体医薬 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでの研究で我々は、CD169分子を発現するマクロファージの亜集団が消化管粘膜固有層に常在し、腸炎の進展に深く関与することを突き止めた。さらにCD169マクロファージ特異的に産生される炎症関連分子の一つ、CCL8/MCP-2を同定した。本研究の目的はCD169マクロファージおよびその機能を標的とした新規炎症性腸疾患治療法を開発することである。
1)抗CCL8抗体の腸炎抑制効果
我々はCCL8の機能を生体内で阻害するため、抗CCL8抗体を新たに作製し、これをデキストラン硫酸(DSS)誘導腸炎マウスに静脈内投与した。アイソタイプ抗体投与群では、血便や体重減少など激烈な腸炎が出現したのに対し、抗CCL8抗体投与群ではこれらの症状が軽減した。DSS投与7日目の大腸では組織破壊、エフェクターサイトカイン(IL-17, IL-22)産生も抑制されることも確認できた。この結果はCCL8が炎症性腸疾患の治療標的としてきわめて有望である可能性を示唆する。
2)腸炎発症時にCD169陽性マクロファージ選択的に産生される他のサイトカインの探索
CD169陽性マクロファージの腸炎の病態形成における役割を包括的に理解するため、CD169陽性マクロファージ特異的に産生されるCCL8以外のサイトカインを検索した。腸炎マウスの大腸からCD169陽性および陰性マクロファージを分取し、まず培養上清中のIL-6,IL-10濃度をELISA法で測定したがいずれも検出限界以下だった。続いてこれらのマクロファージによる様々なサイトカインmRNA発現量を定量PCRで測定した。IL-1, IL-6, IL-23発現量はCD169陰性マクロファージで優位に増加していたのに対し、IL-10は同程度に発現することが分かった。平成26年度までの研究ではCCL8以外のCD169マクロファージ特異的サイトカインは同定できていない。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成26年度までの研究で、これまでほとんど機能の知られていなかったケモカインCCL8がCD169マクロファージ特異的に産生され、腸炎の進展に重要なことを明らかにできた。また抗CCL8抗体がマウスの腸炎モデルの症状を抑制できることも確認できた。以上の結果から、CCL8がIL-1bやIL-23など、既知の炎症関連分子とはまったく異なる新たな治療標的となる可能性が期待できるため、上記(2)のように判断した。
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| Strategy for Future Research Activity |
CD169陽性マクロファージ産生サイトカインの腸炎における役割を明確にするため、同マクロファージ特異的にサイトカインを欠損するマウスを作製する。これを目的としてCD169遺伝子の下流にimproved Cre遺伝子(Shimshek et al. 2002 Genesis)を挿入したマウス(CD169-iCreマウス)を作製した。このマウスをROSA26-YFPマウスと交配し、loxP配列の組み換えが生じることを大腸で確認した(CD169-Cre-YFPマウス)。CCL8遺伝子をloxP配列で挟んだマウス(CCL8floxマウス)は、熊本大学生命資源研究・支援センターですでに個体復元しており、CD169-iCreマウスと交配することでCD169発現細胞特異的にCCL8を欠損するマウスを得る。CCL8の欠損をウェスタンブロット法で確認した後、このマウスにおけるDSS誘導腸炎の重症度を検討する。またCCL8以外のサイトカイン中和抗体の有効性が確認できた場合には、同様の手法でCD169陽性細胞特異的サイトカイン欠損マウスを作製し、炎症性腸疾患の臨床症状を検討する。
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| Causes of Carryover |
抗CCL8抗体投与によりマウスの炎症性腸疾患の症状を改善できる知見が得られたため、平成26年度はCCL8の機能解析を集中的に進めた。これに伴い、CCL8標的細胞の探索と、CCL8の他の炎症性腸疾患モデルにおける役割の解析を平成27年度以降に後ろ倒ししたため、当初予定していた使用額を変更した。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
平成27年度に腸管のCD169陽性マクロファージ特異的分子の検索のため、マイクロアレイ、サイトカインアレイの検査費用を増額する。それらの研究で同定した遺伝子の欠損マウス作製費用、現在作製中のCCL8欠損マウス維持費を増額する。
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