2015 Fiscal Year Research-status Report
心筋リモデリング(組織再改築)を抑制する非翻訳RNAの探索と機能制御
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26460480
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| Research Institution | Toho University |
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Principal Investigator |
赤坂 喜清 東邦大学, 医学部, 教授 (60202511)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
木下 利雄 東邦大学, 医学部, 助教 (00723719) [Withdrawn]
石川 由起雄 東邦大学, 医学部, 客員講師 (30276894)
鈴木 健也 東邦大学, 医学部, 助教 (20516231)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | MicroRNA / 心筋リモデリング / bFGF / 心筋間質細胞 / 線維化 / 高血圧 / 実験動物 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【目的】MicroRNAは標的mRNAに結合し翻訳抑制から蛋白発現を強力に制御する。本研究では心筋リモデリングによる慢性心不全の予防法創生のため、心筋リモデリングに重要な間質線維化の抑制過程で誘導されるmicroRNAを探索した。今回は我々独自に確立したbFGF誘導性心筋リモデリング抑制性の心筋間質細胞を網羅的に解析し、間質線維化抑制microRNA候補を選定し、そのmicroRNAの特異性を検討した。
【研究実施計画】① bFGF投与による心筋間質線維化抑制と心筋リモデリング抑制の検証: 高血圧性Dahl rat心にbFGFを心筋内投与しbFGFによる心筋間質線維化抑制を検証し、bFGF による高血圧性心筋リモデリング抑制能をin vivoで実証した。さらに培養心筋間質線維芽細胞を用いてbFGFによるCollagen type Ⅰ, Ⅲの発現抑制、TIMP-1の発現増加やMMP-9の活性抑制を確認し、bFGFによる心筋間質線維化抑制をin vitroで実証した。② bFGFによる心筋間質線維化抑制microRNAの網羅的解析: bFGF投与下培養心筋間質線維芽細胞においてExiqon社のReal-time PCR arrayに よるmicroRNAの網羅的解析を実施した。コントロール群に比べて投与群で有意に発現上昇するmiR-29c-3pを選定した。③miR-29c-3pの局在をin situ hybridization法で観察した。Exsomeに集約するmiR-29c-3pが心筋間質に確認できた。さらにmiR-29c-3pは高血圧性Dahl rat心において正常血圧Dahl rat心に比べて有意な増加を示した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
①bFGF投与による心筋リモデリングの抑制能を臓器レベルで実証した。②培養心筋間質線維芽細胞を用いてbFGF投与による組織修復蛋白の発現変化を解析し、培養細胞レベルでbFGFによる心筋間質の線維化抑制能を実証した。③bFGF投与における培養心筋間質線維芽細胞の網羅的解析を実施してmiR-29c-3pを選定した。④miR-29c-3pは高血圧心の血管周囲間質に発現し、正常血圧心と比較し有意な発現増加が認められた。
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| Strategy for Future Research Activity |
①miR-29c-3pの局在観察と発現変化：高血圧性Dahl rat心におけるmiR-29c-3p発現性をin situ hybridization法でさらに詳細に解析し、bFGF投与の有無におけるmiR-29c-3pの発現変化を比較検討し、in vivoにおけるmiR-29c-3pのbFGF誘導性の特異性を確認する。
②miR-29c-3pの標的蛋白の選定：miR-29c-3p標的遺伝子候補から、組織修復関連遺伝子を選定する。
③bFGF投与した培養心筋間質細胞におけるmiR-29c-3pの発現変化や組織修復関連遺伝子の蛋白発現変化を検討する。
④培養心筋間質細胞にmiR-29c-3pのInhibitorあるいはMimicの遺伝子導入実験を行い組織修復関連遺伝子の蛋白発現変化を検討し、miR-29c-3pの標的遺伝子の可能性を明らかにする。
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