2016 Fiscal Year Annual Research Report
Investigation of immune tolerance induction method for gene therapy of muscular dystrophy
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26460502
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
喜納 裕美 (早下裕美) 日本医科大学, 医学部, 助教 (60532728)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 遺伝子治療 / AAVベクター / 筋ジストロフィー / 間葉系幹細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、筋ジストロフィーなどの遺伝性疾患に対する根治療法として研究が進められているウイルスベクターを用いた遺伝子治療の際に、最大の障壁となっている免疫応答についての検討を行っている。
生後に免疫寛容誘導を行うことを目標として、正常犬に間葉系幹細胞(MSCs)と同時にAAV-lucを投与し、transgeneの発現の程度をMSC(-), AAV-luc投与のものと比較した。投与方法はまず筋肉内投与で行った。AAV筋肉内投与4週後に投与部位骨格筋の生検を行い、transgeneであるLucの発現を比較したところ、MSC非投与ではLucの発現はほとんど見られなかったが、同時にMSC投与を行ったイヌの筋標本では、Lucの発現が観察され、その周辺にCD4, CD8陽性の細胞が見られた。このことから、MSC投与によりtransgeneの発現減弱は少なくとも遅くなることがわかった。
つぎに、MSCを併用しAAVベクターを全身性投与し、経過を観察した。局所投与の系と同様に、投与から4週後に骨格筋（前脛骨筋）の生検を行い、transgeneの発現を確認した。全身性投与を行ってもtransgeneの発現はMSCを併用した方が減弱が遅いことがわかった。
筋ジストロフィー犬に対し、MSCとAAVを利用した上記と同様のプロトコールで、治療遺伝子発現ベクター（AAV-microdystrophin)とMSCを併用投与し、病態の経過を観察した。結果、非投与の患犬の筋ジストロフィー病態の進行と比較して、MSCとAAVの併用を行った患犬では、病態の進行が2年半年の観察期間全体を通じて非常に軽症であった。四肢筋の代表として前脛骨筋の免疫染色を行ったところ、AAV由来のマイクロジストロフィン特異的な抗体で染色が確認でき、治療遺伝子の発現が継続していることがわかった。したがってMSCと治療ベクターの併用投与により長期にわたり病態が改善されたことが示唆された。
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