2015 Fiscal Year Research-status Report
HTLV-1病原性におけるTaxとHBZの機能的対立の意義
| Project/Area Number |
26460554
|
|---|
| Research Institution | Kyoto University |
|---|
Principal Investigator |
安永 純一朗 京都大学, ウイルス研究所, 講師 (40362404)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
| Keywords | HTLV-1 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本課題ではHTLV-1感染病態（ウイルス複製と細胞増殖）におけるTaxとHBZの役割分担とその制御機構を解析し、病原性発現機序解明に向けた新知見を得る事を目的としている。平成27年度はHBZとTaxの細胞周期制御における役割に関して解析を進めた。HBZタンパク質がヒストン脱アセチル化酵素HDAC3とRb/E2F-1複合体間の結合を阻害することで、E2F-1標的遺伝子の転写を活性化し、結果として細胞増殖を活性化することを報告した（Kawatsuki et al. Oncogene, 2015）。また、興味深いことにTaxはHBZと競合的にRbと結合した。過去の報告では、TaxはRbと結合することでプロテアソーム依存性の分解を受けることが知られている。これらの所見は、HBZとTaxは異なるタイミングでRbと結合し、細胞周期を共に促進している可能性が示唆する。さらに、HBZが免疫抑制性受容体であるT-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains (TIGIT)の発現を誘導する事を見出した。HBZはTIGIT遺伝子プロモーター領域のエピジェネティックな変化と、転写を誘導し、ATL細胞の表面における高発現を確認した。元来TIGITは活性化T細胞などで発現し、その増殖を抑制すると同時に樹状細胞(DC)上のCD155を認識しIL-10の産生を促進し免疫応答を抑制する。HBZ-TgのT細胞およびDCではIL-10の発現が亢進しており、HBZはTIGITの発現誘導を介して宿主免疫を抑制していることが示唆された。本所見はPLoS Pathogensに報告した（Yasuma et al. PLoS pathogens, 2016）。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成27年度は、HBZとTaxが共に宿主の細胞周期制御因子Rbと結合し脱制御することを見出し、当初の目的であったHBZとTaxの細胞周期制御における役割の解析を進め、成果を国際雑誌Oncogeneに発表した。また、HBZとTaxが共にTIGITを発現誘導することも見出し、HTLV-1感染細胞による免疫抑制への関与について解析した結果はPLoS pathogensに発表した。概ね順調に研究を進めていると考えている。
|
| Strategy for Future Research Activity |
1. HBZとTaxの細胞周期に依存する機能と病原性における役割
Tax発現モニターATL細胞株を用いてsingle cell realtime PCRにて細胞周期関連遺伝子の発現解析を行い、細胞周期制御におけるTaxとHBZの役割を解析する。また、ATL患者、HTLV-1感染者由来のプライマリーCD4陽性T細胞における宿主遺伝子とTax、HBZの発現をsingle cell realtime PCRにて評価し、病原性発現機構、発がん機序を解析する。
2. 遺伝子改変マウスの表現型解析
LTR-Tax/HBZ-LTRトランスジェニックマウス由来のプライマリーCD4陽性T細胞を分離し、上記single cell realtime PCRの結果を基に細胞周期関連遺伝子の発現を解析する。
|
| Causes of Carryover |
当初HTLV-1感染細胞から細胞周期毎にsingle cellを分取し、定量PCRを行う予定であったが、Tax発現をモニター可能なATL細胞株を複数樹立することができたため、これらを用いてTax発現細胞とHBZ発現細胞を分離し、single cellレベルでの定量PCRを行う予定とした。そのため研究費を繰り越す必要があった。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
Single cellの分離にはベクトンディッキンソン社製FACSAriaにてTax発現細胞集団を分取した後に、フリューダイム社製のC1システムでSingle cellの分離からcDNA合成を行う。また得られたcDNAは同フリューダイム社製BioMarkにて定量PCRに供する。これら一連の試料調整とPCRに使用する。また、RNA-Seqも行う予定であり、その解析費用に用いる。
|
-
-
-
-
[Journal Article] Gpr176 is a Gz-linked orphan G-protein coupled receptor that sets the pace of circadian behavior.2016
Author(s)
Doi M, Murai I, Kunisue S, Setsu G, Uchio N, Tanaka R, Kobayashi S, Shimatani H, Hayashi H, Chao HW, Nakagawa Y, Takahashi Y, Hotta Y, Yasunaga JI, Matsuoka M, Hastings MH, Kiyonari H, and Okamura H.
-
Journal Title
Nat Commun
Volume: 7
Pages: 10583
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
-
-
-
[Journal Article] Experimental evaluation of the zoonotic infection potency of simian retrovirus type 4 using humanized mouse model.2015
Author(s)
Sato K, Kobayashi T, Misawa N, Yoshikawa R, Takeuchi JS, Miura T, Okamoto M, Yasunaga JI, Matsuoka M, Ito M, Miyazawa T, Koyanagi Y.
-
Journal Title
Scientific Reports
Volume: 5
Pages: 14040
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
