2015 Fiscal Year Research-status Report
ウイルス複製蛋白質を標的にしたHPVゲノム排除方法の開発
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26460564
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| Research Institution | National Institute of Infectious Diseases |
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Principal Investigator |
柊元 巌 国立感染症研究所, 病原体ゲノム解析研究センター, 室長 (70291127)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | ヒトパピローマウイルス / 蛋白質分解 / ユビキチン化 / 子宮頸癌 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ウイルスゲノム複製機構を標的とした新たなHPV排除方法を開発するために、HPVゲノム複製に必要なウイルスDNAヘリカーゼE1の細胞内レベル制御機構の解明を進めた。これまでに、E1が自身のATPase活性に依存してポリユビキチン化を受け、プロテアソームを介して分解されることを見出しており、今年度はE1分解に関わる細胞ユビキチンリガーゼの探索を行った。C33A細胞を用いたHPV DNA複製アッセイ系を用いて、384種類の細胞ユビキチンリガーゼを含む発現プラスミドライブラリーをスクリーニングした結果、複製レベルを低下させる細胞タンパク質としてFBXW5が見出された。一方で、293細胞でFBXW5をノックダウンしても、E1レベルに変化は見られなかった。またFBXW5はcullin RING E3ユビキチンリガーゼの構成タンパク質として働くことから、cullinのNEDD8化阻害剤MLN4924の効果を293細胞で検討したところ、E1レベルに大きな変化は認められなかった。これらの結果から、FBXW5はE1レベルを下げる以外のメカニズムで、HPV複製を負に制御していると考えられた。
また細胞内E1レベルへの各種阻害剤の効果を調べる中で、ポリADPリボースポリメラーゼであるタンキレースの阻害剤XAV939の処理により、293細胞でのE1レベルが上昇することが分かった。タンキレースまたは他のポリADPリボースポリメラーゼがHPV複製を負に制御することが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の計画通り、ハイスループットのHPV DNA複製アッセイ系を用いた細胞ユビキチンリガーゼのスクリーニングが完了した。しかしこれまでにE1のユビキチン化に関わる細胞ユビキチンリガーゼは同定できていない。その原因として、多くの素過程からなるHPV DNA複製の値を、E1レベルの指標にしているためと考えられた。一方で、タンキレース阻害剤XAV939の処理により細胞内E1レベルが上昇するという新たな知見が得られたことから、E1レベルの調節機構解明のための糸口になることが期待される。
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| Strategy for Future Research Activity |
XAV939処理により細胞内E1レベルが上昇するメカニズムを、293細胞でのタンキレースのsiRNAノックダウンにより検討する。また293細胞でHA-TR-TUBEタンパク質を共発現させ、ポリユビキチン化されたE1を高感度に検出する実験系を構築して、E1ユビキチン化とプロテアソーム分解の分子機構を明らかにする。得られた成果については適宜、国際HPV学会で発表する予定である。
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| Causes of Carryover |
年度末納品等にかかる支払いが平成28年4月1日以降となったため、当該支出分については次年度の実支出額に計上予定。平成27年度分についてはほぼ使用済みである。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
上記のとおり。
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[Journal Article] Detection of hypermutated human papillomavirus type 16 genome by Next-Generation Sequencing2015
Author(s)
K. Wakae, S. Aoyama, Z. Wang, K. Kitamura, G. Liu, A. M. Monjurul, M. Koura, M. Imayasu, N. Sakamoto, M. Nakamura, S. Kyo, S. Kondo, H. Fujiwara, T. Yoshizaki, I. Kukimoto, K. Yamaguchi, S. Shigenobu, T. Nishiyama, and M. Muramatsu.
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Journal Title
Virology
Volume: 485
Pages: 460-466
DOI
Peer Reviewed
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