2016 Fiscal Year Annual Research Report
Detection and pathological analyses of specific antibody in cat scratch disease by highly-sensitive ELISA using Japanese-derived strain
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26460678
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
常岡 英弘 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (40437629)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大津山 賢一郎 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10432741)
柳原 正志 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (40379954)
徳田 信子 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70227578)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | Bartonella henselae / 猫ひっかき病 / ELISA / CHAPS / サルコシン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【背景と目的】本研究目的は猫ひっかき病（CSD）の病原体で培養困難なBartonella henselaeに対する血清抗体価を高感度に測定可能なELISAの確立である。使用抗原の基礎的研究としてB. henselae菌体のサルコシン（陰イオン界面活性剤）抽出法を中心に検討してきた。しかし本抽出液は冷蔵下では結晶析出が認められ、その後の操作が煩雑になり、2次元電気泳動法による解析にも悪影響を及ぼすなど、今後の研究に不都合が生じることが判明した。そこで、両性界面活性剤CHAPS使用による抗原精製を中心に変更し、研究を進めた結果、0.1％CHAPS液で抽出後の沈渣を再度0.5％CHAPS液で抽出した上清液がELISA抗原として優れ、この液をDEAE法で精製することでこの抗原精度が向上することが期待された。今年度はこの抽出・精製条件での抗原性をB. henselaeの培地由来別（固形培地および二層培地）に比較検討した。
【方法】B. henselae ATCC49882株を使用して2種類の菌液（固形培地由来菌：チョコレート寒天培地、二層培地由来菌：5％ウサギ血液加HI寒天培地+D-MEM液体培地）を作成した。これら菌液をそれぞれ同様にCHAPS抽出・DEAE精製後、2種類の抗原を使用したELISAを確立し、CSD(疑)患者血清61例と健常人血清25例のB. henselae IgG抗体価を測定し、両者を比較した。
【結果と結語】精製蛋白のウエスタンブロット解析では33kDaおよび11kDa付近に患者血清と強い反応が認められた。2種類のB. henselae菌液（二層培地由来と固形培地由来）のELISA抗原性の比較では二層培地由来菌からの抗原が明らかに優れていた（ROC曲線解析；ｐ＜0.05）。
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