2016 Fiscal Year Annual Research Report
Elucidation of the ultimate carcinogen associated with occupational cholangiocarcinoma
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26460806
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| Research Institution | The Ohara Memorial Institute for Science of Labour |
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Principal Investigator |
圓藤 吟史 公益財団法人大原記念労働科学研究所, 研究部, 客員研究員 (20160393)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山中 健三 日本大学, 薬学部, 教授 (50182572)
加藤 孝一 日本大学, 薬学部, 教授 (60246931)
市原 学 東京理科大学, 薬学部薬学科, 教授 (90252238)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 胆管がん / 1,2-ジクロロプロパン / ジクロロメタン / ハロゲン化炭化水素 / 化学発がん / グルタチオンS-トランスフェラーゼ / 体細胞突然変異 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
オフセット校正印刷会社労働者にみられた胆管がんは、ハロゲン化炭化水素類の高濃度曝露による業務上疾病とされたが、実験動物では再現されていない。それ故、我々は胆管がんとの因果関係を究明するために、ハロゲン化炭化水素類の代謝経路と発がん過程における活性体の生成を明らかにすることを目的に、細胞障害性、遺伝毒性を検討し、原因物質の追究を試みた。
方法は、ヒト肝腫瘍由来のHepaRG細胞を肝細胞様および胆管上皮様細胞に分化させ薬物代謝酵素群を誘導後、1,2-dichloropropane (DCP)および1,2,3-trichloropropane（TCP）を24時間曝露し、細胞生存性をWST-8法により評価した。TCP処理によるmRNAレベルの変化はDNAチップを用いて調べた。次に、不死化ヒト胆管由来細胞株 (MMNK-1細胞: DMEM＋5% FBS )にTNFα(100ng/mL)に4，6，8，10時間曝露した。曝露終了後、カラム抽出法で細胞からtotal RNAを抽出し、逆転写酵素を用いてcDNA (5 mg)を合成した。このcDNAを使用してリアルタイムPCR法（SYBR法）でNFκB体と細胞超変異とクラススイッチ組み換えに関連する酵素の発現量を測定した。インターナルコントロールとしてβ-Actinを用いた。
TCPの細胞毒性はDCPよりも強い。薬物代謝酵素の誘導は毒性に影響を与えなかった。TCP処理細胞のmRNA解析により、CYPおよびGSTよりもGSH再生系酵素蛋白のmRNA合成が高い。CYPの関与よりもGSHによる代謝活性化が毒性発現機構に深く関与している可能性が示唆された。ヒト胎芽由来胆管細胞を用いた検討では、TNFα処理は体細胞超変異とクラススイッチ組み換えに関連する酵素およびNFκBのmRNAレベルを増加させた。同酵素の胆管細胞変異への関与の可能性が示唆された。
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[Journal Article] Screening and surveillance for occupational cholangiocarcinoma in workers exposed to organic solvents. Surg Today.2016
Author(s)
.Kubo S, Takemura S, Tanaka S, Nishioka T, Kinoshita M, Hamano G, Ito T, Yamamoto T, Abue M, Aoki M, Nakagawa K, Hijioka S, Miyamoto A, Osaki Y, Endo G, Kumagai S.
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Journal Title
Surg Today.
Volume: 46
Pages: 705-712
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Role of P450 in Hepatotoxicity and Proliferation in Bile Duct Induced by Exposure to 1,2-Dichloropropane in Mice.2016
Author(s)
Zhang X, Zong C, Zhang L, Garner E, Huang C, Wu W, Chang J, Sakurai T, Ichihara S, Ichihara G.
Organizer
第44回産業中毒・生物学的モニタリング研究会(日本産業衛生学会)
Place of Presentation
東京都
Year and Date
2016-08-04 – 2016-08-05
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[Presentation] 1,2-ジクロロプロパン暴露マウスの肝毒性と胆管細胞の増殖におけるP450の役割.2016
Author(s)
張 驍, Cai ZONG, Lingyi ZHANG, Edwin GARNER, Chinyen HUANG, Wenting WU, Jie CHANG, 桜井 敏博, 市原 佐保子, 市原 学.
Organizer
第43回日本毒性学会学術年会
Place of Presentation
名古屋市
Year and Date
2016-06-29 – 2016-07-01
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