抽出・精製方法の違いがmRNAを指標とした体液の識別検査に及ぼす影響

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26460895
• Research Institution: National Research Institute of Police Science
• Principal Investigator: 阿久津 智子 科学警察研究所, 法科学第一部, 室長 (50356151)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 櫻田 宏一 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (10334228)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: RNA / 抽出・精製方法

Outline of Annual Research Achievements

精液からスピンカラム法および磁気ビーズ法によりRNAを抽出・精製した。得られたRNAについて、血液および唾液の際と同様に、バイオアナライザー（アジレント）を用いてRIN値を算出することにより品質を評価し、抽出・精製法間で比較した。また、それらのRNAをcDNAに逆転写し、TaqManプローブ法によるリアルタイムRT-PCR法でコントロール遺伝子（β-actin, 77 bp及び139 bp）およびターゲット遺伝子（semenogelin Iおよびprotamine 2)を増幅し、相対的定量値を比較した。血痕、唾液斑および精液斑についても同様に検討を行った。
精液において、バイオアナライザーによる解析では、血液および唾液と同様に、スピンカラム法で抽出・精製されたRNAのほうが、磁気ビーズ法と比較して高いRIN値を示すことが確認された。リアルタイムRT-PCR法による解析では、いずれの増幅長のβ-actinにおいても、血液ほど顕著な抽出・精製法によるCt値の差異は認められなかった。一方、ターゲット遺伝子であるprotamine 2においては、抽出・精製法間でCt値に差異が認められ、その結果、dCt法による相対的定量において、異なる定量結果が示された。
斑痕試料においては、磁気ビーズ法で抽出・精製したRNAは低いRIN値を示したが、スピンカラム法で抽出した場合は5～7と中程度のRIN値であったことから、斑痕試料のように、試料中のRNAが低分子化していることが思料される試料においても、スピンカラム法を用いることで、ある程度の品質のRNAを精製可能であることが示された。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

平成27年度の研究実施計画では、産前・産後休暇に伴い平成26年度未実施分の新鮮体液試料に加えて、平成27年度当初計画の斑痕試料、微量斑痕試料、陳旧試料も検討する予定であったが、研究分担者の異動に伴い、その新所属との共同研究体制が整わず、微量斑痕試料及び陳旧試料には着手することができなかった。

Strategy for Future Research Activity

研究分担者との間で共同研究体制を整えることで、微量斑痕試料及び陳旧試料の検討を行うとともに、研究代表者はマルチプレックスRT-PCR法の構築・評価を行う。

Causes of Carryover

研究分担者の異動に伴い、新所属との間で共同研究を立ち上げ、分担金を配分する予定であったが、その体制が整わず、分担金を配分することができなかったため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

研究分担者に分担金を配分し、研究を推進する。