Analysis of mechanism of HCV particle formation, secretion, and associated cellular factor

2016 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26461021
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 森川 賢一 北海道大学, 大学病院, 助教 (60384377)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: GPx8 / C型肝炎ウイルス / 粒子形成

Outline of Annual Research Achievements

HCV感染のライフサイクル研究が大きく進歩し、HCV非構造（NS）蛋白3-4Aプロテアーゼの第1世代特異的阻害薬が2011年に世界で承認された事へとつながっている。最近NS3-4Aプロテアーゼが細胞性宿主因子を標的とする事により、HCVの持続感染や病原性に関与していることが示されている。我々は、世界に先駆けてGPx8がHCVのNS3-4Aプロテアーゼにより切断される細胞性因子であり、GPx8はHCVの粒子形成・分泌に必須であると報告した。しかし、詳細な分子機構については解明されておらず、HCV粒子形成・分泌阻害をターゲットにした創薬開発も進んでいない。本研究ではHCV粒子形成・分泌へのGPx8関与のメカニズム解明に取り組むことにより、HCVの粒子形成機構、分泌機構、病原性発現機構を分子レベルで解明し、宿主因子をターゲットにした新たな抗ウイルス薬開発の基盤形成を目指した。まず、GPx8および変異体選択的発現調整細胞株、恒常的GPx8ノックダウン細胞株を作成した。次に作成した細胞株へのHCV感染実験を行い、培養上清中のウイルス粒子の感染力価および感染細胞内のウイルス粒子の感染力価を比較検討する事によりウイルス粒子の形成・分泌におけるGPx8およびその派生株の役割について検討した。次に、FLAG tag化したGPx8蛋白発現調整細胞株を用いて、HCを感染させた後、抗FLAG tag抗体を用いて免疫沈降によりウイルス粒子形成、および分泌に関与する蛋白を抽出した。免疫沈降で得たサンプルをプロテオーム解析を行い同定した。同定された蛋白を分子生物学的、生物学的種手法を用いて機能解析を行い、いくつかの候補蛋白が、ウイルス粒子形成および分泌へ関与している可能性が示された。

Research Products

• [Journal Article] Retreatment with sofosbuvir, ledipasvir, and add-on ribavirin for patients who failed daclatasvir and asunaprevir combination therapy (2017)
  • Author(s): Suda G, Ogawa K, Yamamoto Y, Katagiri M, Furuya K, Kumagai K, Konno J, Kimura M, Kawagishi N, Ohara M, Umemura M, Ito J, Izumi T, Nakai M, Sho T, Natsuizaka M, Morikawa K, Tsubota A, Shimada N, Iio E, Tanaka Y, Sakamoto N; NORTE Study Group.
  • Journal Title: J Gastroenterol Volume: 印刷中 Pages: 印刷中
  • DOI: 10.1007/s00535-017-1328-z
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Hepatitis B virus X protein impairs α-interferon signaling via up-regulation of suppressor of cytokine signaling 3 and protein phosphatase 2A (2017)
  • Author(s): Tsunematsu S, Suda G, Yamasaki K, Kimura M, Izumi T, Umemura M, Ito J, Sato F, Nakai M, Sho T, Morikawa K, Ogawa K, Tanaka Y, Watashi K, Wakita T, Sakamoto N.
  • Journal Title: J Med Virol Volume: 89(2) Pages: 267-275
  • DOI: 10.1002/jmv.24643
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Safety and efficacy of daclatasvir and asunaprevir in hepatitis C virus infected patients with renal impairment (2017)
  • Author(s): Suda G, Nagasaka A, Yamamoto Y, Furuya K, Kumagai K, Kudo M, Terashita K, Kobayashi T, Tsunematsu I, Yoshida J, Meguro T, Kimura M, Ito J, Umemura M, Izumi T, Tsunematsu S, Sato F, Tsukuda Y, Nakai M, Sho T, Natsuizaka M, Morikawa K, Ogawa K, Sakamoto N; NORTE Study Group.
  • Journal Title: Hepatol Res Volume: 印刷中 Pages: 印刷中
  • DOI: 10.1111/hepr.12851
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Anti-adipogenic and antiviral effects of L-carnitine on hepatitis C virus infection (2017)
  • Author(s): Tsukuda Y, Suda G, Tsunematsu S, Ito J, Sato F, Terashita K, Nakai M, Sho T, Maehara O, Shimazaki T, Kimura M, Morikawa K, Natsuizaka M, Ogawa K, Ohnishi S, Chuma M, Sakamoto N
  • Journal Title: J Med Virol Volume: 89(5) Pages: 857-866
  • DOI: 10.1002/jmv.24692
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Combination of neutrophil-to-lymphocyte ratio and early des-gamma-carboxyprothrombin change ratio as a useful predictor of treatment response for hepatic arterial infusion chemotherapy against advanced hepatocellular carcinoma (2017)
  • Author(s): Tsunematsu S, Suda G, Yamasaki K, Kimura M, Izumi T, Umemura M, Ito J, Sato F, Nakai M, Sho T, Morikawa K, Ogawa K, Kamiyama T, Taketomi A, Sakamoto N.
  • Journal Title: Hepatol Res Volume: 47(6) Pages: 533-541
  • DOI: 10.1111/hepr.12775
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Novel Treatment of Hepatitis C Virus Infection for Patients with Renal Impairment (2016)
  • Author(s): Suda G, Ogawa K, Kimura M, Nakai M, Sho T, Morikawa K, Sakamoto N.
  • Journal Title: J Clin Transl Hepatol Volume: 4(4) Pages: 320-327
  • DOI: 10.14218/JCTH.2016.00032
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Hepatitis B: progress in understanding chronicity, the innate immune response, and cccDNA protection (2016)
  • Author(s): Morikawa K, Shimazaki T, Takeda R, Izumi T, Umumura M, Sakamoto N.
  • Journal Title: Ann Transl Med Volume: 4(18) Pages: 337
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Prevalence and characteristics of naturally occurring sofosbuvir resistance-associated variants in patients with hepatitis C virus genotype 1b infection (2016)
  • Author(s): Ito J, Suda G, Yamamoto Y, Nagasaka A, Furuya K, Kumagai K, Kikuchi H, Miyagishima T, Kobayashi T, Kimura M, Yamasaki K, Umemura M, Izumi T, Tsunematsu S, Sato F, Tsukuda Y, Terashita K, Nakai M, Sho T, Natsuizaka M, Morikawa K, Ogawa K, Sakamoto N; NORTE Study Group
  • Journal Title: Hepatol Res Volume: 46(13) Pages: 1294-1303
  • DOI: 10.1111/hepr.12685
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Viral life cycle of hepatitis B virus: host factors and druggable targets (2016)
  • Author(s): Morikawa K, Suda G, Sakamoto N
  • Journal Title: Hepatol Res Volume: 46(9) Pages: 871-877
  • DOI: 10.1111/hepr.12650
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Efficacy and safety of daclatasvir and asnaprevir combination therapy in chronic hemodialysis patients with chronic hepatitis C (2016)
  • Author(s): Suda G, Kudo M, Nagasaka A, Furuya K, Yamamoto Y, Kobayashi T, Shinada K, Tateyama M, Konno J, Tsukuda Y, Ymasaki K, Kimura M, Umemura M, Izumi T, Tsunematsu S, Sato F, Terasita T, Nakai M, Horimoto H, Sho T, Natsuizka M, Morikawa K, Ogawa K, Sakamoto N.
  • Journal Title: J Gastroenterol Volume: 51(7) Pages: 733-740
  • DOI: 10.1007/s00535-016-1162-8
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Presentation] Analysis of cellular factors involved in the particle formation and secretion of hepatitis C virus. (2016)
  • Author(s): Morikawa K, Suda G, Gouttenoire J, Moradpour D, Sakamoto N.
  • Organizer: 23rd International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses.
  • Place of Presentation: 京都国際会議場（京都府京都市）
  • Year and Date: 2016-10-11 – 2016-10-15
  • Int'l Joint Research
• [Remarks] 北海道大学大学院医学研究科内科学講座消化器内科学分野
  • URL: http://halo.med.hokudai.ac.jp/