2014 Fiscal Year Research-status Report
肝癌由来TCF-4 isoformにはWnt5a/b発現の分子スイッチが内在する
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26461025
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| Research Institution | Kurume University |
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Principal Investigator |
古賀 浩徳 久留米大学, 医学部, 准教授 (90268855)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | T-cell factor-4 / TCF-4 / Wnt / isoform |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は，Wntシグナル伝達系の中枢転写因子であるTCF-4に内在する「SxxSS」という機能モチーフが，Wnt5a/b（とくに5a）の産生および上皮間葉移行（EMT）誘導に関わっているか否かを明らかにすることである．平成26年度は，このモチーフを持つTCF-4アイソフォームであるTCF-4K（Exp Cell Res 2011）を用いて上記の検討をおこなった．すなわち，TCF-4Kに内在する「SxxSS」モチーフのセリン残基（S）をsite-directed mutagenesisでアラニン（A）に置換した下記の変異体を作成し，それぞれ過剰発現細胞におけるWnt5a/b発現等を評価した．変異体はK-mutant 269A (AxxSS)，K-mutant 272A (SxxAS)，K-mutant 273A (SxxSA)である．まずreal-time PCRではK-mutant 269AにおいてWnt5aおよびWnt5b，Wnt3a，ROR2の発現が最も強く認められた．とりわけWnt5a mRNAの発現レベルはコントロールの40～45倍と高く，Western blotでも高発現が確認された．ChIPアッセイではK-mutant 269Aのwnt5a promoter領域への直接結合が確認されたことより，TCF-4はその構造に内在する「SxxSS」モチーフ依存的にWnt5aの発現を調節している可能性が示唆された．Wnt5aはEMTに関与していることより，Wnt5aをノックダウンし，EMT調節因子であるSnailやSLUGの発現を検討した．その結果，SLUGの発現が顕著に低下していた．このことから，TCF-4は「SxxSS」モチーフ依存性にWnt5aの発現調節を介しEMTを制御している可能性が示唆された．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
およそ予定通りに進んでいるが，Wnt5a gene silencingを恒常的におこなうシステムを使用するに至らなかった点が不足していた．
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| Strategy for Future Research Activity |
Wnt5a gene silencingを恒常的におこなうシステムを使用することで，これまでに得られた所見を強固にしていく行程が必要である．また，ヒト肝細胞癌におけるWnt5aやROR2の発現の検討をおこなっていきたい．
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| Causes of Carryover |
次年度以降におけるプロテオミクスに重点的に予算を使用したかったことと，H27年度において複数回の海外（米国，ヨーロッパ）における成果発表をおこないたかったことが，その理由である．
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
プロテオミクス，および複数回の海外（米国，ヨーロッパ）における成果発表に次年度使用額を使用する予定である．
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[Journal Article] CD34(+) cell therapy is safe and effective in slowing the decline of hepatic reserve function in patients with decompensated liver cirrhosis.2014
Author(s)
Nakamura T, Torimura T, Iwamoto H, Kurogi J, Inoue H, Hori Y, Sumie S, Fukushima N, Sakata M, Koga H, Abe M, Ikezono Y, Hashimoto O, Ueno T, Oho K, Okamura T, Okuda S, Kawamoto A, Ii M, Asahara T, Sata M.
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Journal Title
J Gastroenterol Hepatol
Volume: 29
Pages: 1830-1838
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] The Wnt signal transcription factor TCF-4 directly regulates Bcl-xL expression in human hepatocellular carcinoma cells2014
Author(s)
Hironori Koga, Miran Kim, Anna Nakamura, Hirohisa Yano, Mitsuhiko Abe, Yu Ikezono, Toru Nakamura, Takuji Torimura, Jack R. Wands, and Michio Sata
Organizer
AACR 2014
Place of Presentation
San Diego Convention Center, San Diego, CA, USA
Year and Date
2014-04-06
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