2015 Fiscal Year Research-status Report
肝癌由来TCF-4 isoformにはWnt5a/b発現の分子スイッチが内在する
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26461025
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| Research Institution | Kurume University |
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Principal Investigator |
古賀 浩徳 久留米大学, 医学部, 教授 (90268855)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | T-cell factor-4 / TCF-4 / Wnt / isoform / Hes1 / Notch |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成27年度には，Wnt5aとその受容体であるROR2，およびWnt5a発現に関わるTCF-4Kがヒト肝細胞癌（HCC）組織においてどこに局在するかを検討した．まず，Wnt5aはHCC細胞および非癌部肝細胞にはほとんど発現しておらず，腫瘍血管を含む血管内皮細胞に局在していた．一方ROR2は，HCCにも強く発現していたが，とくに小型のHCC細胞に強かった．このことから，HCC細胞も発生過程のごとく特定の時期のみWntシグナルが活性化している可能性が示唆された．次にTCF-4 isoformのHCC組織での発現検討の前に，まずヒト肝細胞癌細胞であるHAK-1Bをsingle cell cultureし，そこから採れてきたクローンについてTCF-4JおよびTCF-4KをPCRで半定量化した．しかしながらK単独ないしJ単独を発現しているクローンは採れず，すべてのクローンで両者が任意の割合で混在した形質を示した．したがって，この両isoformをはじめ，TCF-4 isoform全体（14種）の発現量および組織内局在は極めて検出困難なことが予想された．実際，レーザーマイクロダイセクション（ライカ）を用いて採取した肝癌組織から，QIAamp DNA FFPE Tissue Kitにて抽出したRNAを用いてRT-PCRをおこなったが，混在パターンのみが認められ，JとKとの鑑別は不成功に終わった．
そこで再度細胞解析に戻り，癌幹細胞あるいは癌幹細胞様細胞が濃縮されうるsphere formation下でのTCF-4J過剰発現細胞（J細胞）およびTCF-4K過剰発現細胞（細胞）についてWnt5aを含めたシグナル系分子の発現を検討している．予想外にもTCF-4Jがsphere形成下においてのみNotchシグナル転写因子Hes1を強烈に発現していることがわかり，その解析も併せておこなっている．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
ヒトHCC細胞株におけるsingle cell cultureをおこなって，それぞれのクローンのTCF-4 isoformを解析したが，すべて混在型であった．この検討は当初の計画になかったが，isoformの発現様式を理解する上で有意義であった．レーザーマイクロダイセクションおよびRT-PCR系の構築はうまくいき，実際に機能したが，ヒトHCC組織におけるisoformの鑑別は残念ながら不成功に終わった．
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| Strategy for Future Research Activity |
Wnt5a/ROR2系も含め，同シグナル系と関係が示唆されたNotch-Jagged1/Hes1系へのTCF-4 isoformの関与についても鋭意検討中であり，興味深い所見を得ている．
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| Causes of Carryover |
初年度に比較的効率よく研究が進んだために繰越金額が出たが，年度内の使用金額としたは，ほぼ予定通りである．
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
最終年度において，Wnt-Notchシグナル相関など新たな課題が出てきたため，その解析に使用する予定である．
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[Journal Article] High expression of the putative cancer stem cell marker, DCLK1, in rectal neuroendocrine tumors.2015
Author(s)
Ikezono YU, Koga H, Abe M, Akiba J, Kawahara A, Yoshida T, Nakamura T, Iwamoto H, Yano H, Kage M, Sata M, Tsuruta O, Torimura T.
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Journal Title
Oncology Letters
Volume: 10
Pages: 2015-2020
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Sorafenib for the treatment of advanced hepatocellular carcinoma with extrahepatic metastasis: a prospective multicenter cohort study.2015
Author(s)
Nakano M, Tanaka M, Kuromatsu R, Nagamatsu H, Tajiri N, Satani M, Niizeki T, Aino H, Okamura S, Iwamoto H, Shimose S, Shirono T, Koga H, Torimura T; Kurume Liver Cancer Study Group of Japan.
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Journal Title
Cancer Medicine
Volume: 12
Pages: 1836-1843
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Inhibition of hypoxia-inducible factor via upregulation of von Hippel-Lindau protein induces "angiogenic switch off" in a hepatoma mouse model.2015
Author(s)
Iwamoto H, Nakamura T, Koga H, Izaguirre-Carbonell J, Kamisuki S, Sugawara F, Abe M, Iwabata K, Ikezono Y, Sakaue T, Masuda A, Yano H, Ohta K, Nakano M, Shimose S, Shirono T, Torimura T.
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Journal Title
Molecular Therapy Oncolytics
Volume: 2
Pages: 15020
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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