臨床実用を目指した癌幹細胞標的光線力学的療法の基礎研究

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26461045
• Research Institution: Tottori University
• Principal Investigator: 磯本 一 鳥取大学, 医学部, 教授 (90322304)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 七島 篤志 宮崎大学, 医学部, 教授 (60380838)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 光線力学的療法 / 食道癌 / 化学放射線療法 / 扁平上皮癌 / タラポルフィンナトリウム

Outline of Annual Research Achievements

タラポルフィンナトリウムによる光線力学的治療：PDTの対象となり得る化学放射線療法後の再発性食道癌を想定して、癌幹細胞の性質を持つ扁平上皮細胞株を見つけだし、基礎実験を行った。既報より癌幹細胞の性質を示す扁平上皮細胞株として、昨年用いたOSC-19に追加してHSC-2及びHSC-4を用いた。Western BlotでHSC-2はCD44 variantを強く発現していたが、HSC-4は発現を認めなかった。タラポルフィンナトリウム濃度は0～10μMの範囲で、レーザーは0～5Jの範囲で照射し、MTS Assayによる細胞生存率を確認したところ、いずれの細胞においても効果が得られた。昨年用いたOSC-19と同じく、幹細胞性質を持つと思われるHSC-2及びHSC-4細胞もタラポルフィンナトリウムによるPDTに感受性が高い可能性がある。CD44vの発現が高い幹細胞様性質を持つ癌においては、CD44v～シスチントランスポーター～グルタチオンを標的とした治療法として、酸化ストレス抵抗性を標的とした癌幹細胞に対する治療戦略が基盤となり得る。この目的でPimozideをHSC-2及びHSC-4細胞に添加してMTS Assayを行ったが、PDTの効果を増強する効果は認められなかった。他のPDT効果を増感させる薬剤としてグルタチオン合成阻害剤、及びスルファサラジンの有効成分であるアミノサリチル酸を添加してMTS Assay及びグルタチオン生合成活性を測定する予定である。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

CD44v高発現株、OSC-19及びHSC-2に対するHoechst蛍光染色・DNA fragmentation assay・細胞周期解析でアポトーシス誘導率の検証が十分できていない。腫瘍組織のcDNAマイクロアレイ、マイクロRNAマイクロアレイを行っていない。

Strategy for Future Research Activity

グルタチオン合成阻害剤、アミノサリチル酸を添加してMTS Assay及びグルタチオン生合成活性を測定する。CD44v高発現株、OSC-19及びHSC-2に対するHoechst蛍光染色・DNA fragmentation assay・細胞周期解析でアポトーシス誘導率を検証する。腫瘍組織のcDNAマイクロアレイ、マイクロRNAマイクロアレイを行い、化学放射線治療法の治療抵抗性に関する分子基盤を得る。幹細胞様性質を持つ複数の細胞を用いた実験系を確立したことで、アミノサリチル酸の併用効果の検証を円滑に行える。

Causes of Carryover

CD44v高発現株、OSC-19及びHSC-2に対するHoechst蛍光染色・DNA fragmentation assay・細胞周期解析でアポトーシス誘導率の検証が十分できていない。腫瘍組織のcDNAマイクロアレイ、マイクロRNAマイクロアレイを行っていない。

Expenditure Plan for Carryover Budget

CD44v高発現株、OSC-19及びHSC-2に対するHoechst蛍光染色・DNA fragmentation assay・細胞周期解析でアポトーシス誘導率を検証する。腫瘍組織のcDNAマイクロアレイ、マイクロRNAマイクロアレイを行い（受託）、化学放射線治療法の治療抵抗性に関する分子基盤を得る。