2015 Fiscal Year Research-status Report
免疫異常を基盤とした拡張型心筋症の発症におけるMst1キナーゼの役割の解明
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26461126
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
前嶋 康浩 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 講師 (40401393)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
磯部 光章 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (80176263)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 心筋炎 / 拡張型心筋症 / 制御性T細胞 / キナーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
応募者は平成27年度までにin vitro キナーゼアッセイにてFoxp3がMst1によりリン酸化されることを確認し、さらに質量分析法を用いてFoxp3上のMst1によりリン酸化されるアミノ酸部位を同定することができた。このMst1によるFoxp3のリン酸化部位を特異的に認識するリン酸化抗体を作成してin vivoにおいてMst1がFoxp3を同部位にてリン酸化していることを確認した。またJurkat細胞に野生型およびMst1によるリン酸化部位を変異させたFoxp3レンチウイルスを導入した擬似制御性T細胞を作製してIL-2転写活性などの機能解析を行った結果、in vitroにおいてMst1によるFoxp3のリン酸化が制御性T細胞の機能発現に重要な役割を果たしていることが判明した。
また、Mst1/Mst2-floxedマウスおよびYFP-Cre Foxp3ノックインマウスを入手し、制御性T細胞特異的Mst1欠損マウスを作成している。現在、BALB/cとの戻し交配を行っている最中(F4)である。
さらに、pX330ベクターにFoxp3-pXのD変異をコードしたguide RNAにインサートしてCas9発現ベクターを作製した。その上で、Cas9発現ベクターを受精卵にインジェクションした。ファウンダーマウスをダイレクトシーケンスによってスクリーニングして、目的通りの変異が導入されている個体を選択し、次世代(F1)マウスを作成した。現時点でF2まで得られている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
現在まで、本研究応募時の申請書に記載した研究計画通り、順調に研究が進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
本研究応募時の申請書に記載した研究計画通り、今後は遺伝子改変動物を用いた疾患モデルの解析を中心に行っていく予定である。
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| Causes of Carryover |
本研究計画は平成26年度から平成28年度の3ヶ年計画であり、次年度である平成28年度は本研究計画の3年目にあたるため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
応募時に記載した研究計画・方法に準じて、実験的自己免疫性心筋炎における、Mst1-Foxp3経路により制御されている因子の探索を通した自己免疫性心筋炎の発症及び拡張型心筋症への病状進展の機序の解明を行うために必要な研究資源を入手する目的で使用する。
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[Journal Article] Endogenous Drp1 mediates mitochondrial autophagy and protects the heart against energy stress.2015
Author(s)
Ikeda Y, Shirakabe A, Maejima Y, Zhai P, Sciarretta S, Toli J, Nomura M, Mihara K, Egashira K, Ohishi M, Abdellatif M, Sadoshima J.
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Journal Title
Circ Res
Volume: 116
Pages: 264-278
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] mTORC2 regulates cardiac response to stress by inhibiting MST1.2015
Author(s)
Sciarretta S, Zhai P, Maejima Y, Del Re DP, Nagarajan N, Yee D, Liu T, Magnuson MA, Volpe M, Frati G, Li H, Sadoshima J.
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Journal Title
Cell Rep
Volume: 11
Pages: 125-136
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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