2016 Fiscal Year Annual Research Report
Identification of a factor determining invasion and metastasis in non-small cell lung cancer and its therapeutic application based on comprehensive microRNA analysis
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26461195
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| Research Institution | Jichi Medical University |
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Principal Investigator |
小山 信之 自治医科大学, 医学部, 非常勤講師 (30353460)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 肺癌 / EZH2 / siRNA / マイクロRNA / 網羅的発現解析 / miR-4448 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成２７年度にて、EZH2に対するsiRNAまたはMockとなるsiRNA（陰性コントロール）を導入した２種類の小細胞肺癌細胞株（SBC3、SBC5）から抽出したTotal RNAを用いて行った網羅的マイクロRNA発現解析の結果を評価した。その結果EZH2 siRNAを導入したSBC3とSBC5において共通して有意に発現が亢進または低下したマイクロRNAを複数検出した。これらのマイクロRNAについては、EZH2発現ベクター導入によりEZH2を過剰発現させたSBC3とSBC5において、EZH2 siRNAを導入した細胞株とは逆の発現パターンを示すことを確認した。そのうち発現が最も有意に亢進していたmiR-4448を候補とした。
miR-4448に対する機能解析としてmiR-4448のmimic（標的のマイクロRNAと同様の機能を示す２本鎖RNAヌクレオチド）を作製し、SBC3、SBC5の各小細胞肺癌細胞株に導入して、miR-4448が過剰発現していることを確認した。一方で陰性コントロールとなる２本鎖RNAヌクレオチドを導入することにより、miR-4448の発現が変化しないことも確認した。その後mimicを導入した細胞株においてリアルタイムPCRとウエスタンブロットを用い、E-カドヘリンの発現亢進とビメンチンの発現減弱を確認し、miR-4448が上皮間葉転換（EMT）を抑制することを示した。さらにmimic導入、２本鎖RNAヌクレオチド導入、無処理の条件下でSBC3、SBC5各細胞株に対してCell growth assayとMatrigel invasion assayを行い、miR-4448に対するmimicを導入したSBC3、SBC5の増殖機能、浸潤能が有意に低下していることを確認し、EZH2はmiR-4448発現を抑制することにより癌遺伝子として機能することが示唆された。
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[Journal Article] Treatment and outcomes of advanced/recurrent non-small cell lung cancer harboring the EGFR T790M mutation: a retrospective observational study of 141 patients in Japan.2016
Author(s)
Yamane Y, Shiono A, Ishii Y, Isobe K, Miyauchi E, Kishi K, Nishino M, Sugawara S, Ko R, Koyama N, Yabuki Y, Kobayashi K.
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Journal Title
Japanese Journal of Clinical Oncology
Volume: 46
Pages: 1135-42
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Prognostic factors in patients with advanced thymic carcinoma treated with chemotherapy: a retrospective analysis of 289 patients from NEJ023 Study.2016
Author(s)
Okuma Y, Ko R, Shukuya T, Tateishi K, Imai H, Miyauchi E, Fujiwara A, Sugiyama T, Azuma K, Muraki K, Yamasaki M, Tanaka H, Takashima Y, Soda S, Ishimoto O, Koyama N, Kuyama S, Murase K, Morita S, Takahashi K.
Organizer
The 2016 Annual Meeting of the American Society of Clinical Oncology
Place of Presentation
アメリカ イリノイ州 シカゴ
Year and Date
2016-06-03 – 2016-06-07
Int'l Joint Research
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