肺線維化病態におけるmTOR-SPARC経路の解明と新規バイオマーカーの探索

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26461202
• Research Institution: Nippon Medical School
• Principal Investigator: 吾妻 安良太 日本医科大学, 医学部, 教授 (10184194)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 神尾 孝一郎 日本医科大学, 医学部, 助教 (20465305)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 特発性肺線維症 / mTORC2 / SPARC / XPLN

Outline of Annual Research Achievements

昨年度に引き続き、内因性のmTORC2阻害ペプチドであるXPLNを用いた検討を行った。
siRNAを用いてXPLNをノックダウンした所、mTORC2が活性化され線維化のメディエーターであるSPARCの発現が増加した。同時にS473-Aktのリン酸化も認められたため、XPLNのノックダウンの際にAkt阻害剤を使用した所、SPARCの発現は抑制された。このSPARCの増加はrapamycinでは抑制されず、dual mTOR inhibitorであるpp242で抑制されたため、さらにmTORC2とXPLNの関与が確認された。
SPARCはTGF-b1で誘導される事が報告されているため、TGF-b1との関連を解析した所、XPLNはTGF-b1でdown-regulateされた。これはSmad2, 3のノックダウンでreverseされたため、Smad pathwayが関与していることが考えられた。PI3Kやp38 MAPK の阻害剤は無効であった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

XPLNとmTORC2の関連を解析することになり、当初からの計画変更はあったが、その後の解析自体は問題なく進んでいると考えられる。

Strategy for Future Research Activity

現在、XPLNの強制発現株を作成中である。またmTORC1を抑制することにより、XPLNを介したmTORC2-SPARC axis の解析を予定している。
またhuman sampleでのXPLNやSPARCの発現解析を予定している。

Causes of Carryover

当初は供与を受ける予定の試薬を用いて動物実験も行う予定でしたが、提供を受けることができなくなったため実験計画の大幅な変更がありました。このため、次年度使用額が生じています。

Expenditure Plan for Carryover Budget

In vitroの実験が中心になりましたが、新たな実験計画は順調に進展しており、引き続きその遂行のために使用して参ります。

Research Products

• [Presentation] XPLN Negatively Regulates SPARC Expression by Targeting mTORC2 in Human Lung Fibroblasts (2016)
  • Author(s): Koichiro Kamio, Arata Azuma, Jiro Usuki, Kuniko Matsuda, Minoru Inomata, Nobuhiko Nishijima, Shioto Itakura, Nariaki Kokuho, Hiroki Hayashi, Tomoyoshi Yamaguchi, Kazue Fujita, Yoshinobu Saito, Shinji Abe, Kaoru Kubota, Akihiko Gemma
  • Organizer: American Thoracic Society
  • Place of Presentation: 米国サンフランシスコ
  • Year and Date: 2016-05-14 – 2016-05-17
  • Int'l Joint Research