2014 Fiscal Year Research-status Report
高速AFM（原子間力顕微鏡）を用いたアルツハイマー病の病因因子Aβ凝集機構の解明
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26461266
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
小野 賢二郎 金沢大学, 大学病院, 講師 (70377381)
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2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | アルツハイマー病 / アミロイドβ蛋白 / 高速原子間力顕微鏡 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
研究の目的：アルツハイマー病における病態解明、新たな予防・治療法の開発に向けて、アミロイドβ蛋白（Aβ）の凝集過程を高速AFM（原子間力顕微鏡）を用いてリアルタイムで観察する試験管内モデルを開発・確立し、詳細なAβ凝集過程を明らかにする。
研究実施計画：①試料の準備として、サイズ排除クロマトグラフィーを用いてAβ42溶液をinjectし、不溶画分である成熟線維をのぞき、主にモノマーであるLow molecular weight peak（LMW）とプロトファイブリル（protofibril :PF）のpeakを取り出す。取り出してきたLMW peakとPF peakについて高速AFMを用いて観察する。②高速AFMでサンプルをのせるマイカ上の条件を検討し、最適の観察条件を決め、Aβ線維形成を観察する。
研究結果：①サイズ排除クロマトグラフィーを用いてfreshなAβ42溶液から、主にモノマーであるLow molecular weight peak（LMW）とプロトファイブリル（protofibril :PF）の抽出を行い、電子顕微鏡や電気泳動で確認した。②LMWをインキュベートして線維形成を含む凝集過程の観察条件を決定した。その結果、LMWのインキュベートにより線維がstepwiseに形成されるだけでなく、線維伸長には一方向優位性があることが分かった。
結論：LMWからの線維形成は、stepwiseで一方向優位性に伸長する。今後は、PFからの線維形成を観察し、LMWからの線維形成と比較解析する。また、PFや成熟線維の脱重合過程に関しても検討する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
平成26年度の予定していた試料の準備、観察条件が確立した。また、平成27年度に予定していたLMWからの線維形成の観察が終了した。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成27年度以降は、プロトファイブリル（PF）からの線維形成の条件を確立し、LMWからの線維形成と比較解析する。また、PFやや成熟線維の脱重合過程についても観察を試みる。
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| Causes of Carryover |
予想されていたよりはやくAFMの至適な観察条件が確立し、平成26年度の費用が節約できたため、それに伴う経費は繰り越しした。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
平成27年度は、プロトファイブリル（PF）からの線維形成を観察し、LMWからの線維形成と比較解析する。また、PFや成熟線維の脱重合過程に関しても検討する。これらの画像を内部構造も含めて詳細に解析する。PFは不安定なため、試料の準備や観察には時間がかかることも予想され、平成26年度からの繰り越し分の費用も使用して研究を行う。
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[Journal Article] Molecular topology as novel strategy for discovery of drugs with Aβ lowering and anti-aggregation dual activities for Alzheimer's disease2014
Author(s)
Wang J, Land D, Ono K, Galvez J, Zhao W, Vempati P, Steele JW, Cheng A, Yamada M, Levine S, Mazzola P, Pasinetti GM
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Journal Title
PLoS One
Volume: 9
Pages: e92750
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Efficacy of diflunisal on autonomic dysfunction of late-onset familial amyloid polyneuropathy (TTR Val30Met) in a Japanese endemic area2014
Author(s)
Takahashi R, Ono K, Shibata S, Nakamura K, Komatsu J, Ikeda Y, Ikeda T, Samuraki M, Sakai K, Iwasa K, Kayano D, Yamada M
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Journal Title
J Neurol Sci
Volume: 345
Pages: 231-235
DOI
Peer Reviewed
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