2015 Fiscal Year Research-status Report
dynactin-1ノックアウトマウスを用いた孤発性ALSの病態解明と治療法開発
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26461269
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
河合 香里 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 研究員 (80398007)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
祖父江 元 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任教授 (20148315)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 脳神経外科 / 孤発性ALS / 神経変性疾患 / dynactin-1 / モデルマウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
筋萎縮性側索硬化症(ALS)は極めて予後不良の神経変性疾患であり、未だ根本的治療法は見つかっていない。ALSは家族性が約10%であり、弧発性が約90%とそのほとんどを占めている。現在ALSモデルマウスとして汎用されているSOD1変異マウスは家族性ALSモデルであるが、このマウスから得られた研究結果を基にした臨床試験はいずれも良好な結果を得られておらず、ALSの90%のpopulationを占めている弧発性ALSに特異的な病態を捉えることが、根本的治療法の解明につながるものと我々は考えている。本研究では弧発性ALS患者の運動ニューロンにおいて遺伝子発現変化が認められたdynactin-1に着目し、運動ニューロン特異的にdynactin-1をノックダウンしたDCTN1 コンディショナルノックアウト(CKO)マウスを作成し、ALSの病態解明ならびに新規治療法の開発を目指している。DCTN1 CKOマウスは、運動機能障害、脊髄前角運動ニューロンの脱落、リン酸化ニューロフィラメントの蓄積、ユビキチン化封入体の形成など、ALSに特徴的な表現型、病理像を示す。本研究ではDCTN1 CKOマウスを用いてALS病態の分子機構および増悪因子の解明を目指し、DCTN1 CKOマウス脊髄前角に形成されるユビキチン化封入体構成タンパク質の質量分析による同定と、グリア細胞の活性化により惹起されるサイトカインによる病態増悪機構について検討している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
前年度に引き続いて、サンプルの回収および調整を行った。マウス脊髄前角より抽出したタンパク質を用いて、カラムによるユビキチン化タンパク質の回収に供するため、ある程度まとまった数のサンプルが必要となる。本研究課題のもう一つのテーマであるグリア細胞による病態増悪機構においてもマウス脊髄を用いており、これら２つの課題を遂行するにあたり必要なサンプル数を得ることができなかったため、やや遅れていると判断した。
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| Strategy for Future Research Activity |
１）DCTN1 CKOマウスを用いたプロテオーム解析により、脊髄前角に蓄積するユビキチン化封入体の構成タンパク質を明らかにする。得られた結果に基づき、dynactin-1をノックダウンした培養細胞系で封入体構成タンパク質の異常蓄積が病態に及ぼす影響について検討する。
２）グリア細胞の活性化がみられる病初期における病態増悪機構について、マイクロアレイにて各種サイトカインの変動を解析する。この結果に基づき、dynactin-1をノックダウンした培養細胞系に対するサイトカインの影響、ならびにALS患者髄液サンプルでのELISAによる検証、臨床的重症度などの指標との相関解析を行い、ALSに対するバイオマーカー探索へと結びつける。
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| Causes of Carryover |
1月以降に使用した実験動物施設使用料の支払いが平成28年度になる。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
本年度より翌年度にかけて予定している実験動物関連への支払いに充当する。
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