2015 Fiscal Year Research-status Report
transendocytosis障害による脳小血管病発症機序の解明と治療法開発
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26461276
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
水野 敏樹 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30264782)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 雅樹 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (80264753)
水田 依久子 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80397760)
大原 亮 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80636986) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 脳小血管病 / CADASIL |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【目的】Cerebral Autosomal Dominant Arteriopathy with Sub- cortical Infarcts and Leukoencephalopathy (CADASIL)はNOTCH3が原因遺伝子である遺伝性脳小血管病だが、その発症機序はまだ十分に解明されていない。Notch signalの活性化には、受容体として働くNotch細胞外ドメインが、リガンドと結合後にリガンド発現細胞内へ取り込まれるtransendocytosisが重要であると提唱されている。申請者らが提唱している変異型NOTCH3のtransendocytosis障害によるCADASIL発症機序の解明のため、平成27年度は昨年度に引き続き合成ペプチドによるendocytosisを細胞レベルで検証した。
【方法】Notchシグナルのリガンド蛋白であるJagged-1にmyc-Hisタグを付けたpcDNATM5/FRT/T0ベクター用いて、リガンドを発現する細胞株を樹立した。CADASIL型変異を有するヒトNOTCH3細胞外ドメインを加えて、transendocytosisの有無を免疫染色、western blottingで確認した。
【結果】野生型ヒトNOTCH3細胞外ドメイン断片が細胞内に取り込まれ、lysozomeに局在することを免疫染色で確認した。
【考察】野生型ヒトNOTCH3細胞外ドメイン断片はtransendocytosisでリガンド細胞内取り込まれ、lysozomeで分解されることが示唆された。同様の現象が変異型ヒトNOTCH3細胞外ドメイン断片では障害されているかを今後検討する。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
野生型ヒトNOTCH3断片は作成可能であったが、変異型NOTCH3細胞断片の作成を試みたところ、細胞内で凝集してしまい、抽出が難しい。作成する断片の大きさを変えながらペプチド合成を現在試みている。
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| Strategy for Future Research Activity |
種々の変異型NOTCH3細胞断片を作成してendocytosisの有無を検討するとともに、変異型リガンドを作成することで、endocytosisが障害を受けるかを今後検討する。
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| Causes of Carryover |
前年度実験計画が順調に進まず滞ったため、消耗品の使用が予定より少なかった
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
本年度実験用の消耗品を主に用いる予定である
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[Journal Article] Distinct molecular mechanisms of HTRA1 mutants in manifesting heterozygotes with CARASIL.2016
Author(s)
Nozaki H, Kato T, Nihonmatsu M, Saito Y, Mizuta I, Noda T, Koike R, Miyazaki K, Kaito M, Ito S, Makino M, Koyama A, Shiga A, Uemura M, Sekine Y, Murakami A, Moritani S, Hara K, Yokoseki A, Kuwano R, Endo N, Momotsu T, Yoshida M, Nishizawa M, Mizuno T, Onodera O
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Journal Title
Neurology
Volume: 86
Pages: 1-10
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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