2016 Fiscal Year Research-status Report
Pathomechanism of cerebral small vessel disease due to disturbance of transendocytosis
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26461276
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
水野 敏樹 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30264782)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 雅樹 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (80264753)
水田 依久子 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80397760)
大原 亮 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80636986) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | CADASIL / Notch / transendocytosis |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【目的】Cerebral Autosomal Arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy (CADASIL)はNOTCH３が原因遺伝子である遺伝性脳小血管病であるが、その機序はまだ十分解明されていない。Notch signalの活性化には、受容体として働くNotch細胞外ドメインが、Jaggedなどのリガンド蛋白と結合後にリガンド発現細胞内へ取り込まれるtransendocytosisが重要である提唱されている。申請者らが提唱している変異型NOTCH３のtransendocytosis障害によるCADASIL発症機序の解明のため、平成28年度は昨年度に引き続き、合成ペプチドによるendocytosisを細胞レベルで検証した。またtransendocytosisの可視化のため、NOTCH３細胞外ドメイン発現細胞とJAGGED発現細胞の共培養を行った。
【方法】昨年樹立したJagged発現細胞株を用いて、合成したヒト野生型NOTCH３細胞外断片とCADASIL変異型ヒトNOTCH３細胞外断片の取り込みを観察した。またNOTCH３細胞外ドメイン発現細胞とJAGGED発現細胞の共培養を行い、NOTCH３細胞外断片とJaggedの結合の可視化を試みた
【結果】野生型NOTCH３細胞外断片ではJagged発現細胞に多数取りこまれるのに対して、変異型ではほとんど取り込まれないことを認めた。しかしNOTCH３細胞外断片とJaggedの結合は一部で認められたが、十分な定量はできていない。
【結論】変異型NOTCH３細胞外ドメインのtransendocytosisが障害されていることが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
目的である野生型と変異型NOTCH３細胞外ドメインのtransendocytosisには違いを認めたが、NOTCH３細胞外ドメインとJagged発現細胞の結合の証明がまだ不十分であり、論文化には至っていない。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後NOTCH３細胞外ドメインとJagged発現細胞の結合を明らかにして、transendocytosisの動態を明らかにする予定である。
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| Causes of Carryover |
NOTCH3細胞外ドメインとJagged発現細胞の結合を示す追加実験が必要なため
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
細胞培養およびおよび蛋白発現を確認するための消耗費
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[Journal Article] A Japanese CADASIL kindred with a novel two-base NOTCH3 mutation.2016
Author(s)
Suda, Satoshi; Okubo, Seiji; Ueda, Masayuki; Sowa, Kota; Abe, Arata; Aoki, Junya; Muraga, Kanako; Suzuki, Kentaro; Sakamoto, Yuki; Mizuta, Ikuko; Mizuno, Toshiki; Kimura, Kazumi.
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Journal Title
Eur J Neurol
Volume: 23
Pages: 32-３４
DOI
Peer Reviewed
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