2014 Fiscal Year Research-status Report
抗中性糖脂質抗体と脳脊髄根末梢神経炎の病態解明および抗体の意義
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26461299
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| Research Institution | Fujita Health University |
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Principal Investigator |
島 さゆり 藤田保健衛生大学, 医学部, 助教 (50725984)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
武藤 多津郎 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (60190857)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | lipid rafts / 脳脊髄根末梢神経炎 / neutral ｇlycolipid / 自己免疫 / 中枢・末梢脱髄症（CCPD） |
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| Outline of Annual Research Achievements |
今年度は脳脊髄根末梢神経炎（Encephalomyeloradiculoneuropathy：EMRN）や、広く自己免疫が病態発現に関与する神経疾患について抗中性糖脂質抗体の測定を実施し、本抗体の疾患特異性を調べた。
抗体測定についてはFar-Eastern blot法（薄層プレート（TLCプレート）に中性糖脂質（lactosylceramide(LacCer), glucosylceramide (GlcCer), galactosylceramide (GalCer)、Ceramide（Cer））をそれぞれ塗布し、展開溶媒で展開し、熱転写装置でPVDF膜に転写。そのPVDF膜をblocking bufferで処理後、患者血清（希釈倍率500～2000倍）とで反応させた．その後二次抗体と反応させ、ECLを使用して、陽性バンドの検出を行った）を用い, 中性糖脂質であるLacCer, GlcCer, GalCer,Cerに対する抗体活性を測定した。
脳脊髄根末梢神経炎（Encephalomyeloradiculoneuropathy：EMRN）の症例の追加だけでなく、広く自己免疫が機序に関連するとされる疾患の追加を行った。
①脳炎 ②急性散在性脳脊髄炎 ③多発性硬化症/視神経脊髄炎 ④ギランバレー症候群 ⑤慢性炎症性脱髄性多発神経根炎 ⑥その他疾患の追加及び治療前後の血清・髄液を用い、抗中性糖脂質抗体の存在の有無を確認。EMRN患者においてはその測定結果と患者背景（経過、重症度、検査・画像所見など）との対比を行った。EMRN患者症例では治療前の活動性の高い時期に抗中性糖脂質抗体の存在が認められており、その後病勢が落ち着くと消失を認めているが、追加症例においても、同様の結果が得られている。その他の症例①～⑥においては抗体の存在は現在のところ認めておらず、疾患特異性も高いと考えている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
今年度は抗中性糖脂質抗体の産生機序の解明、lipid raftsへの影響を見るために、患者血清、髄液を凍結乾燥し、そこから全糖脂質の抽出を行い、定量を試みる。同様に対照検体からも抽出を行い、比較定量を行う。髄液、血清中の中性糖脂質が各々患者の臨床状態で変化するのか、もしする場合臨床上のどんなマーカーと相関するのかを明らかにしたいと考えていたが、現在のところ、定量に至っていない。昨年度は全国医療機関からの検索依頼が多数届き、それらへの対応で時間を取り、予定の実験スケジュールが実行できず、全体としての実行の遅れが出ている。
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| Strategy for Future Research Activity |
患者血清、髄液を凍結乾燥し、そこから全糖脂質の抽出を行い、定量を試みる。同様に対照検体からも抽出を行い、比較定量を行う。髄液、血清中の中性糖脂質が各々患者の臨床状態で変化するのか、もしする場合臨床上のどんなマーカーと相関するのかを明らかにする。この定量には、必要に応じてＬＣ－ＭＳを使用する。さらに、剖検脳（できれば脊髄・神経根・末梢神経も同様 検討を行いたい）を用いて、lipid rafts分画をショ糖密度勾配超遠心法で調整、それらから全脂質を抽出（FASEB J 2012）し免疫染色法及び従来の染色法（レゾルシノール試薬、アニサルデート試薬等）定量を行い、その異常を検出・検討する。高感度の検出系を作るため、我々が先に報告している抗glucosylceramide抗体陽性の患者血清(FEBS Lett 2006)及び本研究でのＥＭＲＮ患者血清中の抗体(Neurology, in press)を用い患者脳の中性糖脂質の発現状態、さらにガングリオシド発現をコレラ毒素Bサブユニットをprobeとして解析を行う。同時に、ラフトマーカー蛋白であるTrk神経栄養因子受容体、Ras蛋白、fynチロシンキナーゼ、flotilinなどの抗体で組織染色を行いraftsへの影響を調べる
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| Causes of Carryover |
研究の進歩状況に合わせて、物品を購入したため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
Far-Eastern blot法で使用する試薬として来年度以降も継続して購入予定。各学会への参加に対する旅費なども今後予定している。今年度は全糖脂質の抽出を行い、定量を試みるための試薬なども購入予定。特に微量測定系LC-MSなどでの解析が必要となった時の機械使用料、試薬が新たに必要となる。
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