2014 Fiscal Year Research-status Report
脂肪細胞の分化／機能調節におけるＴ１Ｒ３ホモマー非定型的甘味受容体の機能解明
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26461325
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
柴田 宏 群馬大学, 生体調節研究所, 准教授 (20235584)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 甘味受容体 / 脂肪分化 / T1R3 / Gタンパク / 微小管 / Rho / FoxO1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
２６年度は，申請書で提示した「T1R3ホモマー甘味受容体による脂肪細胞分化抑制シグナル」の作業仮説モデルの検証を中心に研究を行った。
１．T1R3ホモマー甘味受容体刺激による微小管脱重合作用の検討：近年Gαs活性化による微小管脱重合作用が報告されている。今回， 3T3-L1前駆脂肪細胞をスクラロース・サッカリンなどの人工甘味料で刺激することにより，微小管の脱重合とアクチン線維の増生が起こることを確認した。さらに，この作用がGαsのドミナント・ネガティブ変異体（Gαs-G226A）により抑制されること，また逆に構成的活性型変異体（Gαs-Q227L）およびコレラ毒素により再現されることを確認した。また，βアドレナリン作動性受容体（βAR）やGLP-1受容体（GLP-1R）など他のGs共役型受容体刺激によっても微小管脱重合がみられることを確認した。２．微小管脱重合によるRho-ROCK経路活性化の検討： 微小管脱重合によりRho-GEF (GEF-H1)が微小管から遊離して活性化される（Krendel M et al. 2002）。今回，3T3-L1細胞にもGEF-H1が発現し微小管と共局在していることを確認し，甘味刺激による微小管脱重合によりRhoおよびROCKの活性化が起こることを，Rhotekin-Rho結合ドメイン（RBD）を用いたpull-downアッセイおよびRho活性プローブであるRaichu1237Xを用いたリアルタイム・イメージングにより確認した。３．Rho-ROCK経路とAkt-FoxO1系を結びつけるシグナルの検討： 脂肪分化に重要な転写因子であるPPARγとC/EBPαの発現はAktの基質である転写因子FoxO1により抑制的に調節を受ける。今回，スクラロース等の甘味刺激により，脂肪分化初期においてAktおよびFoxO1のリン酸化が抑制されること，またこれらの作用がRho-ROCK経路に依存することを確認し，さらにPI3キナーゼに拮抗する脂質ホスファターゼPTENの発現量が甘味受容体刺激により増加することを確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初想定した作業仮説と矛盾しない結果が得られており，その結果を学会で発表することができている。
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| Strategy for Future Research Activity |
27年度，28年度も当初の研究計画どおり，成熟脂肪細胞およびマクロファージにおける甘味受容体の機能の検討を進めていく予定である。
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