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2016 Fiscal Year Annual Research Report

Development for pancreatic beta cell imaging method by using a fluorescent probe

Research Project

Project/Area Number 26461334
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

藤本 裕之  京都大学, 環境安全保健機構, 助教 (50437274)

Project Period (FY) 2014-04-01 – 2017-03-31
Keywordsイメージング / 蛍光
Outline of Annual Research Achievements

本年度は、昨年度に引き続き膵臓切片の蛍光プローブを用いた染色条件の検討を引き続き行った。また、膵β細胞量を測定する際には、本プローブの特性上GLP-1受容体(GLP-1R)について知見を得ることは重要である。そのため、本蛍光標識プローブを用いることでGLP-R定量の可能性に対する検討を行った。まずは、GLP-1R発現プラスミドを作製することで、GLP-1Rをタンパク質として得ることを試みた。GLP-1Rの遺伝配列をFLAGあるいはDock標識を含むベクターに乗せ、2種類のプラスミドを作製した。作成プラスミドを用いてタンパク質を作成した。細胞をホモジネートし、遠心分離することで、沈殿物と上澄みに分け回収し、SDS-PAGE-western blottingを行い評価した。FLAG標識、Dock標識どちらのプラスミドを使用した場合にも最初の遠心の際に得られた沈殿物に目的となるタンパク質のバンドが認められた。2回目以降のサンプルにおいてはほぼ認められなかったため、細胞破砕液からの分離は一度の遠心分離で可能であることが分かった。次に蛍光プローブと受容体との結合を定量的に評価するためNative Pageによる評価を試みた。プローブとGLP-1Rを予め結合させた複合体を泳動させ、目的バンドにおける蛍光量を測定することで複合体を定量することが目的である。GLP-1Rは7回膜貫通型の膜タンパク質であることから、SDS-PAGEでは高次構造を失ってしまうためNativePAGEを用いて検討した。その結果、Native Pageでのタンパク質の泳動は確認できたが、目的分子量バンドに蛍光シグナルを観察できなかった。バンドの確認はできているため、蛍光強度が検出限界、もしくは複合体の形成が不全であることが原因であると考えられる。今後複合体形成条件の検討や蛍光以外の標識による検討を継続予定である。

  • Research Products

    (10 results)

All 2017 2016

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (7 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results,  Invited: 2 results) Book (2 results)

  • [Journal Article] Development of 111In-labeled exendin(9-39) derivatives for single-photon emission computed tomography imaging of insulinoma2017

    • Author(s)
      Kimura, H., Matsuda, H., Ogawa, Y., Fujimoto, H., Toyoda, K., Fujita, N., Arimitsu, K., Hamamatsu, K., Yagi, Y., Ono, M., Inagaki, N., and Saji, H
    • Journal Title

      Bioorg. Med. Chem.

      Volume: 25 Pages: 1406-1412

    • DOI

      10.1016/j.bmc.2016.12.051

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Noninvasive pancreatic beta cell imaging2017

    • Author(s)
      Fujimoto, H
    • Organizer
      Asia Islet Biology and Incretin Symposium
    • Place of Presentation
      ソウル(韓国)
    • Year and Date
      2017-03-03 – 2017-03-04
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] 111In-Exendin4 SPECTを用いたカナグリフロジンの膵β細胞保護効果の検討2017

    • Author(s)
      浜松圭太、藤本裕之、藤田直尚、塩谷正治、木村寛之、豊田健太郎、佐治英郎、稲垣暢也
    • Organizer
      第31回糖尿病・肥満動物学会
    • Place of Presentation
      はまぎんホール(神奈川県横浜市)
    • Year and Date
      2017-02-10 – 2017-02-10
  • [Presentation] インジウム標識Exendinプローブを用いた 膵β細胞量定量に対する 高血糖の影響の検討2017

    • Author(s)
      藤田直尚、藤本裕之、浜松圭太、村上隆亮 木村寛之、豊田健太郎、佐治英郎、稲垣暢也
    • Organizer
      第31回糖尿病・肥満動物学会
    • Place of Presentation
      はまぎんホール(神奈川県横浜市)
    • Year and Date
      2017-02-10 – 2017-02-10
  • [Presentation] Fujita, N., Fujimoto, H., Hamamatsu, K., Kimura, H., Sano, K., Toyoda, K., Saji, H., Inagaki, N2016

    • Author(s)
      Fujita, N., Fujimoto, H., Hamamatsu, K., Kimura, H., Sano, K., Toyoda, K., Saji, H., Inagaki, N
    • Organizer
      American Diabetes Association 76th Scientific sessions
    • Place of Presentation
      New Orleans LA (USA)
    • Year and Date
      2016-06-10 – 2016-06-14
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 111In-Exendinプローブを用いたマウス in vivo SPECT/CT像の膵β細胞量の非侵襲的定量化のための画像解析法の検討2016

    • Author(s)
      浜松圭太、藤本裕之、木村寛之、藤田直尚、佐治英郎、稲垣暢也
    • Organizer
      第59回日本糖尿病学会年次学術集会
    • Place of Presentation
      国立京都国際会館(京都府京都市)
    • Year and Date
      2016-05-19 – 2016-05-19
  • [Presentation] 先制医療の実現に向けてバイオマーカーとしての膵β細胞量2016

    • Author(s)
      藤田直尚、浜松圭太、藤本裕之、稲垣暢也
    • Organizer
      第59回日本糖尿病学会年次学術集会
    • Place of Presentation
      国立京都国際会館(京都府京都市)
    • Year and Date
      2016-05-19 – 2016-05-19
    • Invited
  • [Presentation] 放射性同位元素標識プローブによる膵 β 細胞量の定量化2016

    • Author(s)
      藤田直尚、浜松圭太、藤本裕之、稲垣暢也
    • Organizer
      第59回日本糖尿病学会年次学術集会
    • Place of Presentation
      国立京都国際会館(京都府京都市)
    • Year and Date
      2016-05-19 – 2016-05-19
  • [Book] 実験医学増刊 Vol.35 No.2 糖尿病 研究の“いま”と治療の“これから”2017

    • Author(s)
      藤田直尚 藤本裕之 浜松圭太 稲垣暢也
    • Total Pages
      235(219-225)
    • Publisher
      羊土社
  • [Book] Medicament News 特集=先制医療が目指すもの 2型糖尿病の場合2016

    • Author(s)
      藤田直尚 藤本裕之 稲垣暢也
    • Total Pages
      28(12-13)
    • Publisher
      株式会社 ライフ・サイエンス

URL: 

Published: 2019-12-27  

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