2014 Fiscal Year Research-status Report
関節リウマチを標的とした抗原特異的新規治療戦略の開発
| Project/Area Number |
26461462
|
|---|
| Research Institution | The University of Tokyo |
|---|
Principal Investigator |
庄田 宏文 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (20529036)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
| Keywords | 関節リウマチ / T細胞受容体 / BiP / 制御性T細胞 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
関節リウマチ患者における自己抗原特異的CD4陽性T細胞の関与の解明および治療応用を目的として、患者末梢血・関節滑膜におけるHLA-DR4拘束性T細胞受容体のレパトア解析、抗原特異的T細胞の表現型の解析を行っている。関節リウマチにおける自己抗原であるBiPに着目し、BiP特異的CD4陽性T細胞の同定を進めた。BiP336-355エピトープ特異的T細胞によるIL-17に代表される炎症性サイトカイン産生は関節リウマチ患者で亢進していた。この反応は健常人にはみられなかった。一方、BiP456-475エピトープ特異的T細胞はIL-10依存的に炎症性サイトカイン分泌を抑制し、BiPに対する自己免疫応答がエピトープレベルでのバランス異常に起因する可能性が示唆された。またBiP456-475エピトープはマウス関節炎モデルの重症度を抑制し、制御性T細胞を誘導することを証明し、治療応用の可能性が考慮された。
関節リウマチ患者における末梢血、関節T細胞受容体(TCR)レパトア解析については、MiSeqを用いたNGS解析の条件検討を行っている。２サンプルのパイロット解析では、CXCR4陰性CD4陽性細胞群におけるTCRレパトア多様性の減少および関節TCRレパトアとの類似性が示唆された。現在関節リウマチ患者より細胞収集、ライブラリ作成を行っており、数十名規模での解析を準備中である。またシングルセルレベルでのTCR解析とNGS解析を並行して２例の患者で行い、関節リウマチにおけるTCRレパトアの減少を確認した。また増殖しているクローンのシングルセルにおける遺伝子発現解析ではGZMB, TBX21, IFNGamma, CXCR4, CD5発現が亢進していることを同定し、これらの遺伝子制御による関節リウマチ治療の可能性について推察された。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成26年度の目標としてHLA-DR4陽性RA患者における末梢血、関節滑膜CD4陽性T細胞のTCRレパトア解析、dominant cloneの同定と表現型解析を挙げた。BiP特異的T細胞解析については英文誌に掲載され、dominant cloneの同定と表現型解析についても現在投稿中である。NGSによるTCRレパトア解析については方法はほぼ確立し、検体数を増やした解析を準備中である。
|
| Strategy for Future Research Activity |
関節リウマチにおけるTCRレパトア解析をNGSによりhigh throughputの系で行う。CD4陽性T細胞の亜分画におけるTCRレパトア解析を数十例で行い、臨床指標との相関、治療による変化を確認することで、TCRレパトアの関節リウマチ病態における重要性を明らかとする。同時に新しい系でもあり、PCRバイアスなどの影響について把握するために、事前にクローンの頻度がわかっているサンプルを用いてTCRレパトア解析する予定である。また関節リウマチ患者におけるdominant clonesを同定し、頻度、分布を調べるとともに、その抗原特異性の解析のためレトロウイルスによるTCR遺伝子導入系を確立させる。
BiPに関しては、BiP336-355特異的T細胞がなぜ関節リウマチ患者で増加するかが不明な点であった。我々はBiP配列が原核生物より種を越えて保存されていることに着目し、微生物由来のBiP(DNAK)における類似配列を同定した。この微生物由来ペプチドに対する関節リウマチ患者T細胞の反応性を検討することで、エピトープレベルでの分子相同性による自己免疫異常の誘導メカニズムについての解析が進むと考えており、検討を行っている。
|
| Causes of Carryover |
試薬代の節約により、残額が発生した。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
継続課題の遂行に必要な試薬代として使用する。
|
