2014 Fiscal Year Research-status Report
造血幹細胞移植後EBV関連リンパ増殖症に対するEBV特異的CTL療法の最適化
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26461580
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
高橋 義行 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (40432273)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小島 勢二 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20313992)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | ウイルス / 造血細胞移植 / 細胞療法 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１）造血幹細胞移植後にEBV再活性化およびウイルス特異的CTL体内動態の観察
90例以上の移植後患者末梢血液中EBV-DNA定量を行い、ATG使用例においてDay７、Day14、Day28の保存血清中のATG血中濃度をELISA法により測定し、EBV再活性化との関連を検討した。またEBV再活性の新規症例においては、Rituxan投与前後にフローサイトメトリー法による末梢血中のリンパ球サブセットの解析を行い、CD20陰性CD19陽性細胞の有無を同定した。Rituxan投与後にEBV-DNA増加症例においては、EBERに対するプローブを用いたフローサイトメトリーFISH法を用いてEBV感染細胞の同定を行い、EBV特異的CTLテトマラー染色により患者体内のEBV特異的CTLのモニタリングを行った。これらの因子がEB-LPDの発症および治療に有用であった。
２）EBV特異的CTL存在下で発症するEB-LPDにおけるエスケープメカニズムの検討
造血幹細胞移植後に体内にEBV特異的CTLが存在しながら免疫抑制剤を中止してもEB-LPDが縮小しない症例を経験し、LMP2,EBNA3A,EBNA3BといったEBV抗原発現について発現が消失していることを確認した。（亀井、高橋ら、日本血液学会東海地方会、名古屋、2015年5月23日報告予定）
３）HLA-A0201/0206,A2402以外のHLA拘束性EBV抗原ペプチドによる対象HLAの拡大
現在当院で行っている「同種造血幹細胞移植後において生じるEBV関連リンパ球増殖症に対するEBV抗原特異的CTLを用いた治療の安全性に関する臨床第I相試験」で用いられているEBV抗原ペプチドはHLA-A0201/0206,A2402拘束性であるが、HLA-A3,A11拘束性ペプチドを合成し、新たにEBV特異的CTLとして培養可能であった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当院では小児に対する造血細胞移植施設として、年間移植数が全国で最も多く、抗胸腺グロブリンを用いたＨＬＡハプロ一致移植といった移植後ＥＢＶ再活性化リスクの高い移植も多く行っているため、順調に研究に必要な検体が確保できている。
１）造血幹細胞移植後にEBV再活性化およびウイルス特異的CTL体内動態の観察：移植後患者末梢血液中EBV-DNA定量を行い、ATG使用例においてDay７、Day14、Day28の保存血清中のATG血中濃度をELISA法により測定し、EBV再活性化との関連を検討した。末梢血中のリンパ球サブセットの解析によるCD20陰性CD19陽性細胞の同定、EBERに対するプローブを用いたフローサイトメトリーFISH法を用いたEBV感染細胞の同定、EBV特異的CTLテトマラー染色により患者体内のEBV特異的CTLのモニタリングがEB-LPDの発症および治療に有用であった。解析数は90例以上に達する。
２）EBV特異的CTL存在下で発症するEB-LPDにおけるエスケープメカニズムの検討：造血幹細胞移植後に体内にEBV特異的CTLが存在しながら免疫抑制剤を中止してもEB-LPDが縮小しない症例を経験し、LMP2, EBNA3A, EBNA3BといったEBV抗原発現について発現が消失していることを確認した（亀井、高橋ら、日本血液学会東海地方会、名古屋、2015年5月23日報告予定）。
３）HLA-A0201/0206,A2402以外のHLA拘束性EBV抗原ペプチドによる対象HLAの拡大：現在当院で行っている「同種造血幹細胞移植後において生じるEBV関連リンパ球増殖症に対するEBV抗原特異的CTLを用いた治療の安全性に関する臨床第I相試験」において新規HLA-A3,A11拘束性ペプチドを合成し、新たにEBV特異的CTLとして機能することを確認でき、臨床試験において対象ＨＬＡが拡大できた。
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| Strategy for Future Research Activity |
１）造血幹細胞移植後にEBV再活性化およびウイルス特異的CTL体内動態の観察
引き続き移植後の患者末梢血液中においてEBV-DNA定量を行い、ATG使用例においてDay７、Day14、Day28の保存血清中のATG血中濃度をELISA法により測定し、EBV再活性化との関連を検討する。またEBV再活性の新規症例においては、Rituxan投与前後にフローサイトメトリー法による末梢血中のリンパ球サブセットの解析を行い、CD20陰性CD19陽性細胞の有無を同定する。Rituxan投与後にEBV-DNA増加症例においては、EBERに対するプローブを用いたフローサイトメトリーFISH法を用いてEBV感染細胞の同定を行い、EBV特異的CTLテトマラー染色により患者体内のEBV特異的CTLのモニタリングを行う。これらの因子がEB-LPDの発症予測、および治療の有効性予測に有用であるかどうかを明らかにする。
２）EBV特異的CTL存在下で発症するEB-LPDにおけるエスケープメカニズムの検討
造血幹細胞移植後に体内にEBV特異的CTLが存在しながら免疫抑制剤を中止してもEB-LPDが縮小しない症例では、EB-LPDと診断されたリンパ節生検からDNAを抽出し、HLAをタイピングし、HLA-LOHについて同定し、SNPアレイ法によりHLAをコードする6番染色体短腕上のUniparental disomy（UPD）について検討する。HLA欠失のない症例ではLMP2,EBNA3A,EBNA3BといったEBV抗原発現についてRT-PCR法を用いて検討する。
３）第3者ドナーからのEBウイルス特異的CTL療法の開始
ウイルス特異的CTL療法適応症例の最適化および対象HLA拡大による患者リクルートを行い、第I相試験を開始する。
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| Causes of Carryover |
EBV特異的CTL臨床試験のリクルートが予想より少なかったため、CTL培養、検査代が未使用額となった。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
EBV特異的CTL臨床試験用のCTL培養、検査代として使用する。
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Research Products
(4 results)
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[Journal Article] Bloodstream infection after stem cell transplantation in children with idiopathic aplastic anemia.2014
Author(s)
Kobayashi R, Yabe H, Kikuchi A, Kudo K, Yoshida N, Watanabe K, Muramatsu H, Takahashi Y, Inoue M, Koh K, Inagaki J, Okamoto Y, Sakamaki H, Kawa K, Kato K, Suzuki R, Kojima S.
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Journal Title
Biol Blood Marrow Transplant.
Volume: 20
Pages: 1145-1149
DOI
Peer Reviewed
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