2015 Fiscal Year Research-status Report
APC及びPSによる第VIII因子制御機構の解明及び新規血友病A治療薬の開発
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26461592
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| Research Institution | Nara Medical University |
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Principal Investigator |
武山 雅博 奈良県立医科大学, 医学部, 助教 (30572010)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
野上 恵嗣 奈良県立医科大学, 医学部, 准教授 (50326328)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 第VIII因子 / プロテインS / 血液凝固 / 活性型プロテインC / 抗凝固 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
血液凝固第 VIII 因子(FVIII)は、血液凝固反応において必須の糖蛋白であり、この欠乏により血友病 A を引き起こす。また、FVIII は、高値であると血栓形成に関与することが最近報告されている。従って FVIII は出血と血栓の相反する病態において極めて重要な因子であるといえる。しかし、FVIII を中心とする凝固血栓形成や制御機序は未だ不明な点が多い。血液凝固制御機構として、抗凝固因子である活性型プロテイン C(APC)はその補因子であるプロテイン S(PS)とともに、FVIIIa や活性型第 V 因子を不活化し凝固を負に制御する。これまでに、PSはAPC 非依存性に FVIII の A2 および A3 ドメインに結合することで、FIXa が FVIIIa に結合することを競合的に阻害し、その結果 tenase complex が形成されず、FXa 生成を抑制し直接凝固を制御することを示した。さらに、PS が FVIII 重鎖 A2 ドメインに結合することも明らかにした。本年度は課題①FVIII重鎖上のAPC結合部位の同定、②FVIII軽鎖上のPS結合部位の同定について研究を進めた。①については、ELISAを用いた実験で、APCがFVIIIに結合することをELISAによる実験で証明し、その結合部位がFVIII A1ドメイン336-372であることを、336-372の合成ペプチドを用いた実験で同定した。②については、PSがFVIII 軽鎖に結合することをELISAにて証明し、その結合がFIXaにより阻害されることを示した。またPSがFVIII C2ドメインに結合することもELISAを用いた実験で証明した。今後、さらにFVIII上のAPCおよびPSの結合部位の同定をペプチドを用いた実験およびアミノ酸を置換した変異FVIIIを用いて行っていく。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当初掲げた4つの課題 ①FVIII重鎖上のAPC結合部位の同定、②FVIII軽鎖上のPS結合部位の同定、③C4bp存在下でのPSのFVIIIに対する作用の検討、④APCおよびC4bp存在下でのPSのFVIIIへの作用の検討を想定していた。
①および②については、順調に研究が進んでいるが、③④については予想していた結果とは異なる結果がでたため、一旦研究はストップしている。今後、まず③の課題について、実験条件の再検討などを行っていく。
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| Strategy for Future Research Activity |
①FVIII重鎖上のAPC結合部位の同定については、FVIII A1ドメイン336-372のペプチドを用いた実験をすすめる。さらにA1ドメイン336-372のうちどこにAPCが結合するのかを、変異FVIIIを作成して検討していく。
②FVIII軽鎖上のPS結合部位の同定については、PSがC2に結合することが証明できたので、今後FVIII C2ドメインの合成ペプチドを用いた結合実験、また変異FVIIIを作成し、それを用いた実験を行う予定である。
③C4bp存在下でのPSのFVIIIに対する作用の検討については、来年度再検討を行いたい。
また、④APCおよびC4bp存在下でのPSのFVIIIへの作用については、③の課題が遂行できた上で検討可能となるため、まず③の課題をすすめることにしたい。
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Research Products
(16 results)
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[Presentation] Seven cases of acquired hemophilia A2015
Author(s)
Nozomi Okahashi, Ei Hoshino, Atsushi Hasegawa, Haruyuki Tanaka, Itsuto Amano, Hiroshi Kimura, Koji Yada, Yasuaki Shida, Masahiro Takeyama, Keiji Nogami, and Midori Shima
Organizer
第77回日本血液学会
Place of Presentation
金沢
Year and Date
2015-10-17
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