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2014 Fiscal Year Research-status Report

ダイヤモンド・ブラックファン貧血の新規動物モデル作製と治療法の開発

Research Project

Project/Area Number 26461596
Research InstitutionNippon Medical School

Principal Investigator

三宅 弘一  日本医科大学, 医学部, 准教授 (90267211)

Project Period (FY) 2014-04-01 – 2017-03-31
Keywordsリボゾーム蛋白質 / ダイヤモンド・ブラックファン貧血 / レンチウイルスベクター / siRNA
Outline of Annual Research Achievements

ダイアモンド・ブラックファン貧血(DBA)の病因に関してはいまだ完全には解明されていないが、DBA患者の約25%においてRPS19の遺伝子異常が報告されている。また、近年RPS19以外のリボゾーム蛋白(RPL5, RPL11, RPS24, RPS17 等)の異常の報告もされてはいるが、その病態は依然として不明名事が多く、現在までに有効な治療法は開発されていない。今までのDBA研究の問題点として(1)患者数が少なく研究に必要なサンプルが手に入りにくい。(2) DBAの細胞自体がin vitroでも増殖が困難である。(3) DBAの病態解析、治療効果検討を行えるモデルが存在しない。などがあげられ、これらの理由からDBAの病体解析およびその治療法の研究をするのは困難であった。我々はリボゾーム蛋白に対するsiRNAを発現する薬剤(テトラサイクリン)誘導性レンチウイルスベクターを作製済みであり、また、KRAB遺伝子(Mol Ther. 11: 627-637, 2005)をすでに組み込んだマウス(KRABマウス)を既に作製済みである。本年度はKRABマウスより骨髄細胞を摂取し、各リボゾーム蛋白に対するsiRNAを発現するレンチウイルスベクターにて遺伝子導入後移植し、生着後テトラサイクリンにてsiRNAを発現し、DBAモデルマウスの作製を試みた。KRABマウスの骨髄細胞にsiRNAとGFPを発現するレンチウイルスベクターにて遺伝子導入し、テトラサイクリン投与にて薬剤誘導性を検討した所、数%と低値であり遺伝子導入効率、誘導効率の検討を行っている。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

KRABマウスの骨髄細胞にsiRNAとGFPを発現するレンチウイルスベクターにて遺伝子導入し、テトラサイクリン投与にて薬剤誘導性を検討した所、数%と低値であり効率を上げる必要性があるため。

Strategy for Future Research Activity

レンチウイルスベクターにて遺伝子導入後のテトラサイクリン薬剤誘導性の効率を上げるため、更なる遺伝子導入効率の上昇の改善、KRABマウスのKRAB発現の検討などを行い薬剤誘導性の効率を上げて行く。また、別のモデル動物作製法としてKRABマウスより卵子を摂取し、siRNAを発現するレンチウイルスベクターにて遺伝子導入後子宮に戻し、Tgマウスを作製する方法の検討も行っていく。

Causes of Carryover

本年度予定していたマウスの骨髄移植実験が、レンチウイルスベクターにて遺伝子導入後のテトラサイクリン薬剤誘導性の効率が悪く移植実験まで出来なかったため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

薬剤誘導性の効率を上昇させるための遺伝子導入効率の上昇の改善、KRABマウスのKRAB発現の検討を行い、移植実験を進めていく。
また、KRABマウスより卵子を摂取し、siRNAを発現するレンチウイルスベクターにて遺伝子導入後子宮に戻し、Tgマウスを作製する方法の検討も行っていく。

  • Research Products

    (9 results)

All 2014

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 4 results,  Open Access: 4 results,  Acknowledgement Compliant: 4 results) Presentation (5 results)

  • [Journal Article] Targeted gene transfer into ependymal cells through intraventricular injection of AAV1 vector and long-term enzyme replacement via the CSF.2014

    • Author(s)
      Yamazaki Y, Hirai Y, Miyake K, Shimada T.
    • Journal Title

      Sci Rep.

      Volume: 4 Pages: 5506

    • DOI

      10.1038/srep05506.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Adeno-associated virus type 8 vector-mediated expression of siRNA targeting vascular endothelial growth factor efficiently inhibits neovascularization in a murine choroidal neovascularization model.2014

    • Author(s)
      Igarashi T, Miyake N, Fujimoto C, Yaguchi C, Iijima O, Shimada T, Takahashi H, Miyake K.
    • Journal Title

      Mol Vis.

      Volume: 20 Pages: 488-96

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Inhibition of S100A6 induces GVL effects in MLL/AF4-positive ALL in human PBMC-SCID mice.2014

    • Author(s)
      Tamai H, Miyake K, Yamaguchi H, Shimada T, Dan K, Inokuchi K.
    • Journal Title

      Bone Marrow Transplant.

      Volume: 49 Pages: 699-703

    • DOI

      10.1038/bmt.2014.18.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Long-term correction of biochemical and neurological abnormalities in MLD mice model by neonatal systemic injection of an AAV serotype 9 vector.2014

    • Author(s)
      Miyake N, Miyake K, Asakawa N, Yamamoto M, Shimada T.
    • Journal Title

      Gene Ther.

      Volume: 21 Pages: 427-33

    • DOI

      10.1038/gt.2014.17.

    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] The D816V c-kit mutation confers higher proliferation activity by JAK-STAT and Src family kinase pathway compared to N822K c-kit mutation in core-binding factor acute myeloid leukemia.2014

    • Author(s)
      Omori I, Yamaguchi H, Kitano T, Miyake N, Miyake K, Inokuchi K.
    • Organizer
      56th ASH Annual Meeting & Exposition
    • Place of Presentation
      San Francisco, CA
    • Year and Date
      2014-12-06 – 2014-12-09
  • [Presentation] Long-term enzyme supplementation into the CSF to treat metachromatic leukodystrophy by intraventricular injection of AAV1 vector.2014

    • Author(s)
      Yamazaki Y, Hironaka K, Miyake N, Hirai Y, Miyake K, Okada T, Shimada T.
    • Organizer
      The 20th Annual Meeting of Japan Society of Gene Therapy
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2014-08-06 – 2014-08-08
  • [Presentation] Trans-BBB gene therapy for metachromatic leukodystrophy using self-complementary type 9 AAV vector.2014

    • Author(s)
      Miyake N, Miyake K, Yamamoto M, Okada T, Shimada T.
    • Organizer
      The 20th Annual Meeting of Japan Society of Gene Therapy
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2014-08-06 – 2014-08-08
  • [Presentation] Efficient Protection of Retina By Tyrosine-Mutated Self-Complementary AAV2 Vector Encoding BDNF in a Rat Retinal Ischemic Injury Model.2014

    • Author(s)
      Igarashi T, Miyake K, Kobayashi M, Takahashi K, Miyake N, Iijima O, Nakamoto K, Hirai Y, Shimada T, Takahashi H.
    • Organizer
      17th Annual Meeting of the American Society of Gene & Cell Therapy
    • Place of Presentation
      Washington DC
    • Year and Date
      2014-05-21 – 2014-05-24
  • [Presentation] Successful Treatment of Adult MLD Model Mice By Intravenous Injection of Self-Complementary Type 9 AAV Vector Expressing ASA.2014

    • Author(s)
      Miyake N, Miyake K, Yamamoto M, Shimada T.
    • Organizer
      17th Annual Meeting of the American Society of Gene & Cell Therapy
    • Place of Presentation
      Washington DC
    • Year and Date
      2014-05-21 – 2014-05-24

URL: 

Published: 2016-05-27  

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