ウイルス感染症における概日時計の役割の解明

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26461685
• Research Institution: University of Yamanashi
• Principal Investigator: 川村 龍吉 山梨大学, 総合研究部, 講師 (70262657)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 概日リズム / ウイルス感染 / 樹状細胞 / 表皮角化細胞

Outline of Annual Research Achievements

＜目的＞異性間性行為においてHIV感染者の精液・膣分泌液中に含まれるHIVがパートナーの外陰部・性器に曝露される際、HIVは粘膜・皮膚上皮から侵入後、所属リンパ節に運ばれて宿主での永久的な感染を成立させる。そこで、性行為HIV感染における最も重要な初期ターゲット細胞である表皮内ランゲルハンス細胞（以下LCs）のHIV susceptibility （HIV易感染性）に概日リズムが存在するか否かについて検討した。
＜方法＞　まず、健常ボランティアの末梢血から得た単球をGM-CSF/ IL-4/ TGF-b存在下で一週間培養することで単球由来ランゲルハンス細胞（monocyte-derived LCs; mLCs）を作製した。次に、LC上のHIV感染レセプターであるCD4, CCR5発現の日内変動をフローサイトメトリーにて検討した。さらにmLCsに50% horse serumによるSerum shockを行い、各mLCs細胞の時計遺伝子を同調させたのち、24h, 30h, 36h, 42h, 48h後にHIV BaL（R5 HIV）をTCID50 = 100000/mlで曝露し、2時間後にmLCsを3回PBSにて洗浄後培養した。HIV曝露7日後にそれぞれのmLCs群を回収し、PE標識抗langerin抗体およびAPC標識抗CD11c抗体(ともにLCマーカー)で染色後、FITC標識抗HIVp24抗体でintracellular stainingし、フローサイトメトリーにてmLCsのHIV感染率を比較解析した。
＜結果と考察＞ mLCsにおけるCD4, CCR5発現において日内変動は観察されなかった。またmLCsのHIV感染率においても概日リズムは観察されなかった。同様の実験をmonocyte-derived DCs; mDCsにおいても検討したが、HIV感染レセプターの発現およびHIV感染率において概日リズムは観察されなかった。現在、ヒト(HSV)ヘルペスウイルスについて、その重要な感染ターゲットである表皮角化細胞を用いて同様の実験を検討中である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

性行為HIV感染における最も重要な初期ターゲット細胞である表皮内ランゲルハンス細胞のHIV易感染性に概日リズムが存在しないことが明らかになった。

Strategy for Future Research Activity

現在、ヒト(HSV)ヘルペスウイルスについて、その重要な感染ターゲットである表皮角化細胞を用いて、HSV感染レセプターの発現およびHSV感染率に概日リズムが存在するかを検討中である。

Causes of Carryover

消耗品が予定より安く購入できたため余剰金が発生した。

Expenditure Plan for Carryover Budget

上記で生じた余剰金は本年度の消耗品として使用する予定である。

Remarks

http://www.med.yamanashi.ac.jp/clinical/dermatol/index.html