2015 Fiscal Year Research-status Report
ペプチド修飾型Ago2/miRNA複合体によるがん特異的デリバリーシステムの開発
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26461961
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| Research Institution | Tokyo Medical University |
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Principal Investigator |
上田 しのぶ 東京医科大学, 医学部, 助手 (00521874)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
須藤 カツ子 東京医科大学, 医学部, 兼任講師 (50126091)
黒田 雅彦 東京医科大学, 医学部, 教授 (80251304)
高梨 正勝 東京医科大学, 医学部, 講師 (80312007)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | miRNA / Ago2 / 遺伝子治療 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
microRNA(miRNA)はがんの発生や抑制に関与しており、血中のmiRNAはエクソソーム内に存在することで、RNaseによる分解から逃れている。これまでに、がん特異的に結合するペプチドを発現させたエクソソームの作製に成功し、がん幹細胞の増殖を抑制するmiRNAを内包させ、腫瘍移植マウスの血中に投与すると、がんの増殖を抑制することを明らかにした。しかし、血中のmiRNAはエクソソーム内だけでなく、Argonaute 2 (Ago2)蛋白質と複合体を作ることで安定的に存在していることが報告された。本研究では、ペプチド修飾型Ago2/miRNA複合体を用いたがん特異的なmiRNAデリバリー法を開発し、より効果的ながん治療への実用化を目指す。
今年度の当初の目的はEGFR結合ペプチドであるGE11配列を結合させたAgo2-GE11/miRNAをレンチウイルスを使ってHEK293に感染させ、Ago2-GE11-GST/HEK293細胞を作製することであった。しかしながらレンチウイルスによって遺伝子導入を行った結果、細胞の形状に変化を与え、今後の実験結果に影響すると考えたため予定を変更し、レンチウイルスは使用しないこととした。しかしながら、当初治療として用いる予定であったlet-7aよりもより効果的に、がん幹細胞が化学療法や酸化ストレスに抵抗性を示す性質に対して影響を与えることによって、乳がん細胞の増殖を抑制することが示唆されるmiRNAを見出した。またin vivoでmiRNAのデリバリー効果とがん細胞増殖抑制効果を検討するための実験系の確立を行ってきた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の研究計画に忠実ではないが、がん幹細胞をターゲットとしたがん増殖抑制効果を持つmiRNAを明らかにしたことにより、GE11を使ってEGFR発現細胞をターゲットとする必要がなくなる可能性が示唆され、let-7aを用いるよりもさらに有用な治療となる可能性があるため。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初計画していたmiRNAよりも乳がん幹細胞に対する抑制効果が高いことが示唆されたmiRNAを明らかにした。このmiRNAをin vivoでどのようにしてがん細胞に到達させるかが本研究の課題であり、Ago2と結合させることによってmiRNAが細胞内に到達できるかどうかを確認する。まずはin vitroでの細胞増殖抑制効果を確認し、さらにin vivoでは移植マウスを用いたがん細胞増殖抑制効果を検討する予定である。
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| Causes of Carryover |
今年度はin vitroの実験が大部分であり、研究室内で日常的に使用している器具などでまかなえる部分が大きかったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
来年度は動物実験を行う予定であり、マウス、核酸合成、蛋白質精製用の抗体、カラムなどに今年度以上に多くの予算が必要となるため、来年度に合算して使用する。
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Research Products
(8 results)
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[Journal Article] Novel types of small RNA exhibit sequence- and target-dependent angiogenesis suppression without activation of Toll-like Receptor 3 in an age-related macular degeneration (AMD) mouse model.2015
Author(s)
Takanashi M, Sudo K, Ueda S, Ohno S, Yamada Y, Osakabe Y, Goto H, Matsunaga Y, Ishikawa A, Usui , Kuroda M.
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Journal Title
Mol Ther Nucleic Acids.
Volume: 4
Pages: e258
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Phosphorylation status determines the opposing functions of Smad2/Smad3 as STAT3 cofactors in TH17 differentiation.2015
Author(s)
Yoon JH, Sudo K, Kuroda M, Kato M, Lee IK, Han JS, Nakae S, Imamura T, Kim J, Ju JH, Kim DK, Matsuzaki K, Weinstein M, Matsumoto I, Sumida T, Mamura M
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Journal Title
Nat Commun.
Volume: 6
Pages: 7600
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] An Interleukin-33-Mast Cell-Interleukin-2 Axis Suppresses Papain-Induced Allergic Inflammation by Promoting Regulatory T Cell Numbers.2015
Author(s)
Morita H, Arae K, Unno H, Miyauchi K, Toyama S, Nambu A, Oboki K, Ohno T, Motomura K, Matsuda A, Yamaguchi S, Narushima S, Kajiwara N, Iikura M, Suto H, McKenzie AN, Takahashi T, Karasuyama H, Okumura K, Azuma M, Moro K, Akdis CA, Galli SJ, Koyasu S, Kubo M, Sudo K, Saito H, Matsumoto K, Nakae S
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Journal Title
Immunity
Volume: 43 (1)
Pages: 175-186
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] The E3 ligase synoviolin controls body weight and mitochondrial biogenesis through negative regulation of PGC-1β.2015
Author(s)
Fujita H, Yagishita N, Aratani S, Saito-Fujita T, Morota S, Yamano Y, Hansson MJ, Inazu M, Kokuba H, Sudo K, Sato E, Kawahara K, Nakajima F, Hasegawa D, Higuchi I, Sato T, Araya N, Usui C, Nishioka K, Nakatani Y, Maruyama I, Usui M, Hara N, Uchino H, Elmer E, Nishioka K, Nakajima T
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Journal Title
EMBO J.
Volume: 34(8)
Pages: 1042-55
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] CCR8 regulates contact hypersensitivity by restricting cutaneous dendritic cell migration to the draining lymph nodes.2015
Author(s)
Yabe R, Shimizu K, Shimizu S, Azechi S, Choi BI, Sudo K, Kubo S, Nakae S, Ishigame H, Kakuta S, Iwakura Y
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Journal Title
Int Immunol.
Volume: 27(4)
Pages: 169-181
DOI
Peer Reviewed
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