心停止ドナーからの肺移植における血管内皮細胞の破綻とその抑制

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26462128
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 岡崎 幹生 愛媛大学, 医学部附属病院, 講師 (50467750)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 佐野 由文 愛媛大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (60322228)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 肺移植 / 心停止ドナー / 虚血再灌流障害

Outline of Annual Research Achievements

心停止ドナーからの肺移植後の虚血再灌流障害におけるmolecular mechanismはいまだ不明な部分が多く、臨床応用のためにもその解明が重要である。われわれの研究成果では、心停止ドナーからの肺移植後の移植肺の機能改善に抗炎症作用が強く関与している可能性が示唆された。また、心停止ドナーからの肺移植後の虚血再灌流障害は、生体肺移植・脳死肺移植後の虚血再灌流障害とは異なった病態であることが示唆された。本研究では、心停止ドナーからの肺移植後の虚血再灌流障害を抑制・予防することを目的とした。動物モデルとして血管内皮細胞をGFPで標識したVegfr-1 GFPマウスを用いた。ドナーマウスを失血死させ、室温で保存する心停止ドナー群と、4℃で保存する生体ドナー群を作成した。3時間保存後に気管支肺胞洗浄を行い、フローサイトメトリー法で分析したところ、心停止ドナー群では多くのGFP陽性細胞が回収されていた。すなわち、血管内皮細胞は再灌流前の温虚血時にすでに破綻している可能性が示唆され、primary graft dysfunctionの大きな要因であると考えられた。虚血から1時間後に再灌流した肺についても、摘出し、フローサイトメトリー法、PCR法、ウエスタンブロッティング法で解析している。さらに、病理組織学的にも肺障害・血管内皮細胞障害をH&E染色、免疫染色、Tunnel染色等による分析をすすめている。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

動物モデルとして血管内皮細胞をGFPで標識したVegfr-1 GFPマウスを用いた。ドナーマウスを失血死させ、室温で保存する心停止ドナー群と、4℃で保存する生体ドナー群を作成した。3時間保存後に気管支肺胞洗浄を行い、フローサイトメトリー法で分析したところ、心停止ドナー群では多くのGFP陽性細胞が回収されていた。虚血から1時間後に再灌流した肺についても、摘出し、フローサイトメトリー法、PCR法、ウエスタンブロッティング法で解析している。さらに、病理組織学的にも肺障害・血管内皮細胞障害をH&E染色、免疫染色、Tunnel染色等による分析をすすめている。

Strategy for Future Research Activity

マウス肺移植モデルを用いて、心停止ドナー肺と生体ドナー肺をそれぞれ移植する。移植・再灌流から1時間、4時間、24時間後に気管支肺胞洗浄および摘出肺の評価を、フローサイトメトリー法、PCR法、ウエスタンブロッティング法で解析する。病理組織学的にも肺障害・血管内皮細胞障害をH&E染色、免疫染色、Tunnel染色等により分析する。さらに、スフィンゴシン-1-リン酸やR-spondin3による虚血再灌流障害抑制効果を検証する。

Causes of Carryover

各種抗体、試薬、実験用縫合糸等に関しては他の研究で残ったものを使用できた。動物実験の回数は当初の予定より少なく経過しており、次年度使用額が生じた。

Expenditure Plan for Carryover Budget

実験動物、実験用縫合糸の他、フローサイトメトリー、ウエスタンブロッティング等にしようする各種抗体や、染色用試薬にしようする。また、動物飼育料、機器使用料、学会参加費等にも使用する計画である。