Clinical and molecular biological study of hereditary lung cancer caused by EGFR germline mutation

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26462133
• Research Institution: Kyorin University
• Principal Investigator: 大塚 弘毅 杏林大学, 医学部, 学内講師 (70439165)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 渡邊 卓 杏林大学, 医学部, 教授 (00191768) ; 藤原 正親 杏林大学, 医学部, 准教授 (20407026) ; 横山 琢磨 杏林大学, 医学部, 学内講師 (50439197) ; 松島 早月 杏林大学, 医学部, 実験助手 (80231596) ; 大西 宏明 杏林大学, 医学部, 教授 (80291326)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: EGFR V843I germline変異 / 遺伝性肺癌症候群 / 次世代シーケンス / 全ゲノムシーケンス / 遺伝子改変マウス / 遺伝子変異導入細胞 / プロテオミクス / 分子シミュレーション

Outline of Annual Research Achievements

1.EGFR germline変異遺伝性肺癌症候群の臨床および遺伝子学的解析　EGFR V843Igermline変異遺伝性肺癌症候群の患者の腫瘍組織、血液のDNAを用いて、全ゲノムシーケンスを行いい、EGFR V843I以外の癌関連遺伝子変異リスクを有しないこと、腫瘍にはEGFR L858Rに加えてTP53 R248W somatic変異を有することを明らかにした。また手術後の経過が良好な家族の肺癌のターゲットシーケンスでは、EG FR V843IとL858R変異のみを認めた。2.EGFR germline変異による肺癌発癌性の解明　EGFR V843I変異マウスの腫瘍の発生を確認した。コントロールとして、遺伝子改変マウス作製に用いたC57BL/6Jマウスの野性型も自然発がんを検討した。3.EGFR ger mline変異細胞の機能解析　NIH-3T3細胞を用いて、V843Iと共存するL858R EGFR遺伝子変異導入細胞を作製し、V843I変異導入細胞の増殖能、腫瘍形成能を確認した。またEGFR以下のシグナル伝達経路（ EGFR、ERK1/2、STAT5 ）の活性化を確認した。EGFR V843I germline変異遺伝性肺癌症候群の肺癌症例から肺癌培養細胞を樹立し、樹立した肺癌培養細胞から蛋白を抽出して、LC/MSによるプロテオミクスを行った。免疫チェックポイント阻害剤による治療の可能性を求めて、その標的となる免疫チェックポイント分子群の発現を検討した。4.EGFR germline変異遺伝性肺癌症候群の予防法、治療法の開発　動的３次元EGFR蛋白コンピューターシミュレーションにより、V843Iおよびその変異と共存するL858R EGFR変異蛋白と各種分子標的薬の動的ドッキングシミュレーションを行い、既存のEGFR阻害剤の多くは無効であることが予測された。樹立肺癌培養細胞を用いたMTS法による薬剤感受性試験でも同様の結果が得られた。