MicroRNAプロファイリングによる頸動脈石灰化粥腫の安定化機構の解明

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26462169
• Research Institution: Nagoya City University
• Principal Investigator: 片野 広之 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (30295612)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山田 和雄 名古屋市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (90150341)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: carotid endarterectomy / calcium score / microRNA / microarray

Outline of Annual Research Achievements

高石灰化プラーク、低石灰化プラークそれぞれにおいて発現増強または抑制を示すmiRNAを調べるため、とくにこれまでの研究結果から明らかとなった、不安定性に関係する血管新生に関する成長因子と、安定性に関係する石灰化生成に関与するRNAの調節制御に関わるmiRNAを明らかにするべく、miRNA microarray分析を行う試料としてヒト頸動脈プラークをカルシウムスコアを基準として高～低石灰化群に分類して蓄積した。対象とするヒト頸動脈プラークは、頸動脈内膜剥離術によって摘出した標本で、摘出後ただちにRNA later処理を行った。石灰化含有度の評価は術前MDCTAでのカルシウムスコアで行った。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

より正確に効率的にmiRNAを検出するべく試料数をより多く確保したため、microarrayの施行がやや遅れた。

Strategy for Future Research Activity

標本を粉砕処理しRNAを抽出、RNeasy lipid tissue mini kit (QIAGEN)を用いて精製、2100 BioanalyzerにてRNA qualityを確認しcDNAを合成、Cyanin 3-CTP、Cyanin 5-CTPでAgilent linear Amplification kits (Agilent)を用いてラベルし、Cy3-sample cRNA および Cy5-reference cRNA をAgilent rat oligo microarrays (～20,000 unique 60 mer oligonucleotides) Agilent hybridization solutionとともに60℃でハイブリダイゼーションさせる。Agilent DNA Microarray Scanner (G2565BA) でアレイをスキャンし Feature Extraction softwareで検出する

Causes of Carryover

より正確に効率的にmiRNAを検出するべく試料数をより多く確保してmicroarrayを施行するため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

試料数をより多く確保して効率的にmicroarrayを施行する