Establishment of bone metastasis treatment by regulating hyaluronan network and osteoclast

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26462261
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 浦川 浩 名古屋大学, 医学部附属病院, 病院講師 (60584753)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 西田 佳弘 名古屋大学, 医学系研究科, 准教授 (50332698) ; 筑紫 聡 名古屋大学, 医学系研究科, 寄附講座講師 (90378109) [Withdrawn] ; 小澤 英史 愛知県がんセンター(研究所), 分子病態学部, 研究員 (60635572) [Withdrawn] ; 新井 英介 名古屋大学, 医学部附属病院, 病院助教 (40612841) ; 生田 国大 名古屋大学, 医学部附属病院, 医員 (40732657) ; 安藤 雄一 名古屋大学, 医学部附属病院, 教授 (10360083)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 転移性骨腫瘍 / 破骨細胞 / ヒアルロン酸 / 骨修飾薬

Outline of Annual Research Achievements

各種癌細胞株の細胞外マトリックス・細胞膜上受容体・細胞内シグナル伝達のネットワーク抑制の作用を明らかにするために、ヒト乳癌細胞のセルラインであるMDA-MB-231とマウス肺癌細胞のセルラインのルイス肺癌細胞を用いてヒアルロン酸合成酵素のmRNAやヒアルロン酸やヒアルロン酸合成酵素の蛋白発現の評価を行った。Particle Exclusion Assayを行い細胞外マトリクスの評価も実施した。各セルラインにおける細胞外、細胞周囲、細胞内のヒアルロン酸量をSandwich-ELISA法によるヒアルロン酸定量により評価した。各細胞株における細胞外マトリックスへの影響ついてParticle Exclusion Assay 、細胞自身のヒアルロン酸発現についてヒアルロン酸免疫染色を施行した。MDA-MB-231とルイス肺癌細胞において、ビスフォスフォネート製剤であるゾレドロン酸を用いた場合のCell viability assay (MTT)、Motility assayによる運動能、Invasion assayによる浸潤能、アポトーシスの評価を行った。各セルラインにおいてヒアルロン酸合成阻害薬4-methylumbelliferone(4-MU)とゾレドロン酸の共投与下のMTT、運動能、浸潤能、アポトーシスの評価を行った。また、CD44の免疫染色を行い4-MUやヒアルロン酸オリゴ糖投与後の各セルラインにおける発現の解析を行った。これらの実験により乳癌、肺癌のセルラインにおける細胞外マトリックス・細胞膜上受容体・細胞内シグナル伝達のネットワークに対するヒアルロン酸合成阻害剤とゾレドロン酸の影響を評価した。また、破骨細胞分化させた培養骨髄細胞に対する4-MU投与の影響を評価した。マウス骨転移モデルにおける4-MUとゾレドロン酸の共投与の影響についても評価を行った。