滑膜肉腫特異的融合遺伝子のin vivo機能解析及び創薬ターゲットの探索

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26462264
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 濱田 健一郎 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (50649043)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 王谷 英達 地方独立行政法人大阪府立病院機構大阪府立成人病センター, 整形外科, 医員 (60727965) ; 中 紀文 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (90601964)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 滑膜肉腫 / 創薬 / 抗腫瘍効果

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的は申請者らが樹立したドキシサイクリン誘導SS18-SSX抑制滑膜肉腫細胞株を用いてin vitro, in vivoで滑膜肉腫細胞における融合遺伝子SS18-SSX抑制による抗腫瘍効果を時間制御下に厳密に評価し、融合遺伝子が創薬ターゲットとなり得るかを評価すること、更には融合遺伝子のin vitro, in vivoでの機能を評価することである。また、融合遺伝子抑制単独の抗腫瘍効果に加えて、融合遺伝子SS18-SSX抑制下での既存抗癌剤あるいは新規分子標的治療薬併用の抗腫瘍効果を評価することも可能である（Combined therapyの評価）。研究の進行は以下のように計画している。１）滑膜肉腫特異的融合遺伝子SS18-SSXの腫瘍原性の評価；ヌードマウスの動物実験モデルを用いてSS18-SSXが抑制された状態での腫瘍形成能を評価し、融合遺伝子SS18-SSXが腫瘍原性に与える影響を評価する。（微小転移に対する治療効果）。実際にはドキシサイクリンを投与した滑膜肉腫細胞をドキシサイクリン内服中のヌードマウスに摂取し、腫瘍の形成率を調査する。２）滑膜肉腫特異的融合遺伝子SS18-SSX抑制による抗腫瘍効果の評価；ヌードマウスの動物実験モデルを用いて実際に形成されている腫瘍に対するSS18-SSX抑制の抗腫瘍効果を評価する。（既存の腫瘍に対する治療効果）。実際には滑膜肉腫細胞を摂取し、腫瘍形成したヌードマウスにドキシサイクリンを内服させ、腫瘍体積を経時的に調査し滑膜肉腫特異的融合遺伝子SS18-SSXを標的とした治療法の効果を評価する。３）融合遺伝子標的治療と他治療薬との治療相乗効果評価；ドキシサイクリンによる滑膜肉腫の抗腫瘍効果が確認された後、他治療薬との併用効果を評価する。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

前年度までに申請者らが樹立したドキシサイクリン誘導SS18-SSX抑制滑膜肉腫細胞株（YSSi, ASSi）を用いてin vitro、in vivoで滑膜肉腫細胞における融合遺伝子SS18-SSX抑制による抗腫瘍効果を確認し、滑膜肉腫特異的融合遺伝子SS18-SSXが治療標的となり得ることを確認した。本年度は滑膜肉腫特異的融合遺伝子が、腫瘍原性に与える影響を評価した。1週間ドキシサイクリンを添加し培養したYSSiを同じく1週間ドキシサイクリンを内服させたヌードマウスに接種し、ドキシサイクリン内服を継続させ腫瘍形成能を評価下。コントロールはドキシサイクリンを添加せずに培養したYSSiをドキシサイクリン内服させていないヌードマウスに接種したものを用いた。造腫瘍能を詳細に検討するため接種細胞数を漸減させ同様の実験を複数回施行した。接種後1ヶ月の時点での腫瘍形成を比較したところ、ドキシサイクリン添加・内服群で有意に腫瘍形成が低下していた。滑膜肉腫特異的融合遺伝子SS18-SSXが抑制されると腫瘍形成が抑制され、融合遺伝子は腫瘍原生に影響を与えることが確認できた。

Strategy for Future Research Activity

形成された腫瘍に対する滑膜肉腫特異的融合遺伝子SS18-SSXの抗腫瘍効果およびSS18-SSXの腫瘍原性に与える影響が確認できた。これらの結果によりSS18-SSXが腫瘍に対する治療標的となり得ること、また再発・転移予防の治療標的となり得ることが新たに判明した。今後は、既存または他の新規治療法と融合遺伝子標的治療の併用療法について検討する。既存治療薬群、ドキシサイクリン投与群、既存治療薬＋ドキシサイクリン群、コントロール群に群分けし投薬実験を行い融合遺伝子治療と既存治療の併用療法の抗腫瘍効果について検討する。また、融合遺伝子治療のメカニズムを解明するため、ドキシサイクリン投与による細胞シグナルの解析や、遺伝子変化の解析を行い、有効な併用療法の可能性についても合わせて検討を行う。有用な併用療法のターゲットが見つかれば、in vitro, in vivoで同様に融合遺伝子との併用療法の動物実験を行い新規治療法と融合遺伝子標的治療の有用性について検討を行う。

Causes of Carryover

学外分担者の研究において未使用額が生じた為。

Expenditure Plan for Carryover Budget

今年度に計画していた研究を来年度に変更し、引き続き分担者が実施する。