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2014 Fiscal Year Research-status Report

超音波刺激法によるscaffold-free再生軟骨作成と再生医療

Research Project

Project/Area Number 26462292
Research InstitutionShiga University of Medical Science

Principal Investigator

松末 吉隆  滋賀医科大学, 医学部, 病院長 (30209548)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 今井 晋二  滋賀医科大学, 医学部, 准教授 (90283556)
Project Period (FY) 2014-04-01 – 2017-03-31
Keywords再生医学 / 軟骨細胞 / 整形外科
Outline of Annual Research Achievements

これまでの予備実験で高濃度濃縮培養すると軟骨細胞は基質を産生する。しかし、ガラスやpolycarbonateなどの通常のシャーレ上で培養すると急速に細胞接着が起こり、この接着した細胞は脱分化を起こすことが判明していた。また、出来上がったscaffold-free 軟骨constructを取り出そうとしても、polycarbonateなどのシャーレ表面との接着が強く、これを鋭的に切離すると他の5面は軟骨器質で覆われているのに、残りの1面は脱分化した線維芽細胞が並んだ歪なconstructが出来上がる。これを改善する為に細胞と全く接着しないセラミック製メンブレンを使用した。
採取した軟骨細胞は一旦、1.0X106cells/dishで単層培養により2~3週間培養増殖させた後にセラミック製メンブレン上に高濃度で細胞を播種して高濃度培養する。
このscaffoldを必要としない我々の培養系では、その条件を変えることにより軟骨類似器官の厚さ、硬さなどの形態を調節可能であるという利点を持っている.この利点を生かし、軟骨分層欠損への充填に理想的な形態(円筒形)と硬度をもつ軟骨類似器官形成のための至適条件を見出す為、1.0、2.0、 および 4.0×10*7 cells/cm2 と具体的な軟骨細胞の濃度を変えて培養した。その結果、4.0×10*7 cells/cm2が最もしっかりした再生軟骨片が作成できた。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

次年度には得られたscaffold-free 軟骨constructをウサギ膝関節に実際に移植することを予定している。昨年の実験で移植に耐えうるしっかりした再生軟骨片が作成できた。

Strategy for Future Research Activity

scaffold-free軟骨constructによる関節軟骨部分欠損修復の評価にはウサギ膝関節軟骨部分欠損モデルを用いる予定である.実験用ウサギ膝関節軟骨に直径4mmの軟骨部分欠損を作成する.各週齢5匹ずつを予定している。scaffold-free軟骨constructの移植の問題点としては、ウサギが運動する際に移植軟骨類似器官が脱落してしまう可能性が考えられる.軟骨constructはプレスフィットによる固定を予定しているが、脱落の問題が発生した場合には軟骨constructの形態、硬度の調節とともに、フィブリン糊による接着や骨膜パッチによる縫合などでの対応を考えている。

Causes of Carryover

今年度は動物実験の数が少なかったために、動物代やそれに関わる試薬等の研究費を消費できなかった。

Expenditure Plan for Carryover Budget

RT-PCR法用プライマー、抗Ⅱ型コラーゲン抗体、組織化学関連試薬、そして動物代(ウサギ)に使用予定である。また、研究実績発表のための旅費にも一部使用予定である。

  • Research Products

    (6 results)

All 2015 2014

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (3 results) (of which Invited: 2 results)

  • [Journal Article] Improved quality of cartilage repair by bone marrow mesenchymal stem cells for treatment of an osteochondral defect in a cynomolgus macaque model2015

    • Author(s)
      Araki S, Imai S, Ishigaki H, Mimura T, Nishizawa K, Ueba H, Kumagai K, Kubo M, Mori K, Ogasawara K, Matsusue Y
    • Journal Title

      Acta Orthop

      Volume: 86 Pages: 119-126

    • DOI

      10.3109/17453674.2014.958807.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Comparison of repair between cartilage and osteocartilage defects in rabbits using similarly manipulated scaffold-free cartilage-like constructs2014

    • Author(s)
      Oda K, Mori K, Imai S, Uenaka K, Matsusue Y
    • Journal Title

      J Orthop Sci

      Volume: 19 Pages: 637-645

    • DOI

      10.1007/s00776-014-0574-7.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Extracellular and intracellular mechanisms of mechanotransduction in three-dimensionally embedded rat chondrocytes2014

    • Author(s)
      Shioji S, Imai S, Ando K, Kumagai K, Matsusue Y
    • Journal Title

      PLoS One

      Volume: 9 Pages: e114327

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0114327.

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 私の膝関節外科のあゆみ2014

    • Author(s)
      松末吉隆
    • Organizer
      第47回中国・四国整形外科学会
    • Place of Presentation
      尾道市
    • Year and Date
      2014-11-08 – 2014-11-09
    • Invited
  • [Presentation] Lidocaineはウサギ軟骨細胞にRho-kinase依存性のmembrane blebbingを起こす2014

    • Author(s)
      前田勉、今井晋二、豊田太、熊谷康佑、森幹士、松浦博、松末吉隆
    • Organizer
      第29回日本整形外科学会基礎学術集会
    • Place of Presentation
      鹿児島市
    • Year and Date
      2014-10-09 – 2014-10-10
  • [Presentation] Joint preservation by autogenous osteochondral graft transplantation for osteonecrosis of the knee2014

    • Author(s)
      Matsusue Y, Kubo M, Uenaka K, Nakagawa Y
    • Organizer
      1st Congress of Asia-Pacific Knee, Arthroscopy and Sports Medicine Society
    • Place of Presentation
      奈良市
    • Year and Date
      2014-04-14 – 2014-04-15
    • Invited

URL: 

Published: 2016-05-27  

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