新規ミトコンドリアー小胞体制御経路を機軸とした敗血症性脳症誘発機序の病態解明

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26462348
• Research Institution: Tokyo Medical University
• Principal Investigator: 内野 博之 東京医科大学, 医学部, 教授 (60266476)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 諸田 沙織 東京医科大学, 医学部, 助教 (30719711) [Withdrawn]
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 脳内シノビオリン(Syvn) / SyvncKOマウス / 神経細胞死 / 敗血症性脳症(SE) / ERAD

Outline of Annual Research Achievements

敗血症性脳症（Septic Encephalopathy:SE)の脳障害発症機序は未知で、その標的分子も明らかではない。本研究では、小胞体関連分解機構のERAD（Endoplasmic Reticulum-associated Degradation）にも関与するユビキチンリガーゼ（E3）のシノビオリン(Syvn)に焦点を置き、SEの実態をミトコンドリア‐小胞体（Endoplasmic Reticulum：ER）制御経路を機軸とした情報伝達系との連関解析に展開することを目的した。２０１４年度は①敗血症性脳症誘発時の脳内シノビオリン(Syvn)発現の分布、病理組織学的解析を施行した。第8-10週令の雄性C57B6 wildマウス（体重25-30g）とSyvn遺伝子ヘテロ欠損（syno+/-）マウス（SyvncKOマウス）を用いて回盲部結紮＋２回穿刺による（CLP）誘発敗血症性脳症モデル（SAEモデル）を作製し、。モデル作製１、６、１２時間後、１、２日後に脳凍結切片（25μm）を作製してSyvnの免疫組織化学的解析とHE染色による細胞死の評価を目指したが、SyvncKOマウスを用いたSAEモデル作成は、当初、SEに対して抵抗性を示すとの予想に反して１２時間以内にすべて死亡するという事実が明らかとなった。そのため１２時間後までの経過の中で脳神経細胞死が脳のどの部位に発現するかを検討した。SAE作成６時間後までは脳のどの部位においても細胞死は見出されなかったが、１２時間後においては左右大脳皮質（左２３％、右２２％）および左右海馬（左５％、右４％）に細胞死が認められた。また、Syvnの免疫組織化学的解析を施行したが、抗体のqualityが十分でなく脳内の分布を明確にすることは出来なかった。
また、SyvncKOマウスが十分な数確保することが難しく②敗血症性脳症誘発時における脳内Syvnを介した遺伝子発現の網羅的解析は施行出来なかった。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

今回SAE作成後の解析時間を１２時間以内とせざるを得なかった理由は、当初、SyvncKOマウスがSEに対して抵抗性を示すとの予想に反して１２時間以内にすべて死亡するという事実が明らかとなったためである。ただ、SyvncKOマウスの作成は時間を要し一度に大量に実験を行うことが難しいため結論付けるのは尚早と思われる。また、研究分担者の諸田が退職したため研究の遂行がかなり制限されたためである。

Strategy for Future Research Activity

wildマウスに対してシノビオリン抑制剤を投与する形でSyvncKOマウスに近似したモデルを作成して再度preliminaryな検討を行い方針を再検討していきたいと考えている。

Causes of Carryover

小額の端数分を繰り越したため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

今年度の研究費と併せて使用する予定である。