2015 Fiscal Year Research-status Report
胎盤栄養膜細胞の浸潤能獲得におけるガレクチンファミリーによる制御機構
| Project/Area Number |
26462502
|
|---|
| Research Institution | Kanazawa Medical University |
|---|
Principal Investigator |
東海林 博樹 金沢医科大学, 一般教育機構, 准教授 (10263873)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
有川 智博 金沢医科大学, 一般教育機構, 講師 (70452670)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
| Keywords | 胎盤 / 栄養膜細胞 / 浸潤 / ガレクチン / レクチン |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、胎盤栄養膜細胞の 浸潤性細胞（invasive trophoblast） への分化系をモデルとして、浸潤能獲得におけるガレクチンファミリーによる制御機構の解明を目指している。これまでの解析から、ラット栄養膜細胞（Rcho-1細胞）分化系においては、十数種あるガレクチンのうちのガレクチン４の発現が、浸潤性細胞への分化に伴って低下することが重要らしいことを見いだしている。今回、ガレクチン４発現低下の意義解明を目的として、Rcho-1細胞にガレクチン４遺伝子を導入し、過剰発現の影響を解析した。その結果、ガレクチン４を過剰発現した細胞同士が有意に高率に接着することが認められた。このことから、ガレクチン４はRcho-1細胞の未分化状態において、細胞間の接着を促進することにより、未分化Rcho-1細胞の特徴である上皮細胞様の性質維持に促進的に働いている可能性が示唆された。浸潤性の細胞への分化は、上皮様の細胞から間葉系の細胞への変化ともとらえられ、ガレクチン４の発現低下が上皮様の性質を失うことにつながるものと考えられる。
一方我々は、Rcho-1細胞にはガレクチン４の従来知られているタンパク質よりも分子量の小さい新規アイソフォーム（short form）が発現している可能性を示してきた。今回これに関してRT-PCR法によりさらに解析を進めたところ、ガレクチン４遺伝子のエキソン３とエキソン４の間に、新規のエキソンが存在し、これが選択的スプライシングによって利用されることにより、新規アイソフォームが形成される可能性が示された。ガレクチン４の低分子量アイソフォームは、データベース上ではヒトにも見いだされるが、その機能は解析されていない。従来型のタンパク質との機能の比較等を含めて、細胞の浸潤能獲得における役割を解明していきたい。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
浸潤能獲得の際のガレクチン４発現低下の意義はこれまで不明であったが、Rcho-1細胞におけるガレクチン過剰発現の影響を解析することにより、その一端が明らかとなった。すなわち、ガレクチン４の発現低下が上皮様の性質を失うことにつながる可能性が示された。また、ガレクチン４新規アイソフォームについても構造の解析が進んだ。
|
| Strategy for Future Research Activity |
今後は、以下の２点を中心に解析を進める。
（１）栄養膜細胞におけるガレクチン４の働きについてさらに解析を進める。まずshort formのタンパク質精製を含めた解析を行い、分子の実態を解明する。そして、その発現を操作したときの影響（過剰発現、siRNAよる発現抑制等）を従来型を操作したときの影響と比較しながら、ガレクチン４機能の全容に迫りたい。
（２）ガレクチン９の浸潤能獲得における働きを解明する。平成26年度までに、ガレクチン９はヒト栄養膜細胞（JEG-3）の突起形成を促進することや、Rcho-1細胞分化系で発現が増強される傾向にあることを見いだしている。今後はガレクチン９についても遺伝子操作により解析を進める。
|
| Causes of Carryover |
マウス個体を用いて胎盤の遺伝子操作を行う動物実験を実施しなかったため、次年度使用額が生じた。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度は比較的費用のかかる生化学実験、培養実験、動物実験等を予定しているので、主にこれらの実験に必要な物品購入にあてる。
|
