2015 Fiscal Year Research-status Report
絨毛性腫瘍に特異的なhCG糖鎖構造をベースにした新規腫瘍マーカーの確立
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26462520
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
山本 英子 名古屋大学, アジアサテライトキャンパス学院, 特任准教授 (10432262)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柴田 清住 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90335026)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 絨毛癌 / hCG / 糖転移酵素 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
絨毛癌細胞株Jarに糖転移酵素GnT-IVa shRNAベクターを導入した細胞株（Jar/shGnT-IVa）とGnT-IVa過剰発現株（Jar/GnT-IVa）から、それぞれの培養上清を回収し、0:10～10:0の割合で混合し、抗hCG抗体とGSL-IIレクチンを用いたサンドイッチELISAを行ったがいずれの条件においても検出はできなかった。そこで、GnT-IVaの他の標的分子を見つけるため、Jar/GnT-IVaとコントロール細胞を用いたレクチンブロットを行った。DSAレクチンブロットでは80-100kDaの分子が、GSL-IIレクチンブロットでは約75kDaおよび35kDa以下の分子の糖鎖修飾が変化しておりこれらがターゲット分子である可能性が判明した。一方、GnT-IIIによる糖鎖変化を検出できるE4-PHAレクチンブロットでは変化は認められなかった。
GnT-IVaの標的分子検索のほかの方法として、GnT-IVaのプロモーター解析を利用することとした。転写因子cRelが発現調整に関与することが予想されたため、絨毛癌細胞株JarにcRelを発現抑制したモデルを作成した。cRel発現抑制により、細胞増殖および浸潤と遊走能が低下することを確認した。さらにcRel発現抑制有無により発現調整される分子検索のため、マイクロアレイ解析を行った。トロンボポエチン、細胞外基質であるテネイシン、ケモカインのCCL１やCCL14の転写レベルでの差が認められた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
抗hCG抗体とGSL-IIレクチンを用いたサンドイッチELISAの確立が上手く進まなかったため、hCG以外の標的分子を検索することとしたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
絨毛癌の新規腫瘍マーカー確立としてhCGの糖鎖およびhCG以外の分子の可能性を含めて、研究を進める。GnT-IVa過剰発現モデルによる糖鎖付加が亢進した分子を特定するために、DSAレクチンブロットとGSL-IIレクチンブロットのゲルを用いた質量分析法を追加する。また、絨毛癌の新規マーカーとなる分子の解明のため、cRel発現変化によるマイクロアレイの結果をin vivoおよびin vitroで確認する。
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