Development of ovarian cancer-specific gene therapy by liposome-processed oncolytic adenovirus

2016 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26462527
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 濱田 雄行 愛媛大学, 医学部附属病院, 講師 (90172973)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: オンコリティックアデノウイルス / リポソーム / 婦人科腫瘍 / コンドロイチン硫酸 / 抗体 / ヘパリン

Outline of Annual Research Achievements

陽性荷電のリポソームDOPE/DOTAP/EPC を作成しβ-gal 発現アデノウイルスAd-β-gal を包埋し、抗アデノウイルス抗体存在下でβ-gal の発現を見ることにより、DOPE/DOTAP/EPC の至適配合比率を決定した。24 well dishにA549細胞を20000/500ul/wellで撒き、抗アデノウイルス抗体存在下で3日間培養し、X-galで染色し細胞のX-gal陽性率を検討した。溶媒について検討すると、水、5％糖腋、10mM HEPES, 5%糖腋＋10mM HEPES等の比較を行うと、10mM HEPES+5%糖腋が最も良好であった。リポソームDOPE/DOTAP/EPCについては、その比率を40％、55％、5％で8mMの濃度が最も良好な抗体存在下での感染効率を示した。量的比率に関しては、Ad-β-gal を1000MOI 15ulにリポソーム10ulを加えるのが最も良好であった。腫瘍特異性を持たせるために、軟骨等の生体内物質のポリマーで、陰性荷電を有しその受容体がCD44で腫瘍特異性を有するコンドロイチン硫酸を用いて検討した。Ad-β-gal/1000MOI 15ul-リポソーム10ulにコンドロイチン硫酸5mMを１ul加えると、非添加時に比べ抗体存在下における感染効率が10倍に増加した。コンドロイチン硫酸の陰性荷電は、生体内物質であるため弱く、リポソームの陽性荷電を十分に中和していない可能性があるため、さらに、強い陰性荷電を有するヘパリンの添加を行ったところ、さらに、感染効率が3倍増加した。

Research Products

• [Journal Article] A novel, polymer-coated oncolytic measles virus overcomes immune suppression and induces robust antitumor activity (2016)
  • Author(s): Nosaki, K., Hamada, K., Takashima, Y., Sagara, M., Matsumura, Y., Miyamoto, S., Hijikata, Y., Okazaki, T., Nakanishi, Y., Tani, K.
  • Journal Title: Molecular Therapy-Oncolytics Volume: 3 Pages: 1-9
  • DOI: 10.1038/mto.2016.22
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] Development of new oncolytic virotherapies for malignancies. (2016)
  • Author(s): Miyamoto, K., Nozaki,K., Sagara,M., Takishima,Y., Wang,B., Yang,J., Matsuura,K., Yotsuya,R.,Inoue,H., Yamada,K., Kohara,H., Ogata H., Hamada,K. Tani, K.
  • Organizer: 第22回日本遺伝子細胞治療学会
  • Place of Presentation: 東京都港区（虎ノ門ヒルズフォーラム）
  • Year and Date: 2016-07-28 – 2016-07-30
• [Presentation] Novel polymer-coated oncolytic measles virus overcomes immune suppression and induces robust antitumor activity. (2016)
  • Author(s): Nosaki, K., Takishima, Y., Sagara, M.,Matsumura, Y.M., Miyamoto. S., Yang, J., Matsuura, K., Okazaki, T., lnoue, H., Nakanishi, Y., Hamada,K., Tani, K.
  • Organizer: 第22回日本遺伝子細胞治療学会
  • Place of Presentation: 東京都港区（虎ノ門ヒルズフォーラム）
  • Year and Date: 2016-07-28 – 2016-07-30
• [Presentation] Improvement of antitumor activity in intraperitoneal ovarian cancer model by a noble cloned carrier cell infected with oncolytic adenovirus. (2016)
  • Author(s): Hamada, K., Takagi, K., Sugiyama, T.
  • Organizer: 19th Annual Meeting of ASGCT,
  • Place of Presentation: Washington, D.C.USA
  • Year and Date: 2016-05-04 – 2016-05-07
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 癌遺伝子治療のための新規キャリアー細胞のクローニング (2016)
  • Author(s): 濱田雄行，高木香津子，杉山隆.
  • Organizer: 第68回日本産婦人科学会総会
  • Place of Presentation: 東京都千代田区（東京国際フォーラム）
  • Year and Date: 2016-04-21 – 2016-04-24
• [Patent(Industrial Property Rights)] 麻疹ウイルスの精製方法、ポリマー修飾麻疹ウイルスの製造方法、及び麻疹ウイルス精製物 (2016)
  • Inventor(s): 濱田 雄行、滝蔦 佑人、谷 憲三朗
  • Industrial Property Rights Holder: 濱田 雄行、滝蔦 佑人、谷 憲三朗
  • Industrial Property Rights Type: 特許
  • Industrial Property Number: 特願2016-200207
  • Filing Date: 2016-10-11