p38 enhances middle ear proliferation during bacterial otitis media

2016 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 26462566
• Research Institution: Juntendo University
• Principal Investigator: 古川 正幸 順天堂大学, 医学部, 先任准教授 (20359524)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 岡田 弘子 順天堂大学, 医学部, 助教 (20433774) ; 笠井 美里 順天堂大学, 医学部, 非常勤助教 (70549279)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: p38

Outline of Annual Research Achievements

１）2種のC57BL/6マウス（Wild-type p38+/+ p38+/-）の側頭骨にHaemophilus influenzae10５ 個を注入し急性中耳炎を発症させる。中耳粘膜を時間経過（1h, 3h、6h、24h, 48h, 72h, 5day, 7day）で8グループに分ける。RIPA buffer中で中耳粘膜を剥離し、それぞれの時間で中耳粘膜の蛋白を等量測定し、SDS-PAGEを行う。右中耳にHaemophilus influenzaeを注入する。Haemophilus influenzaeに感染したマウス中耳粘膜を時間経過（1h, 3h、6h、24h, 48h, 72h, 5day, 7day）で8グループに分ける。対照はHaemophilus influenzaeではなくPBSを注入した左中耳を用いる。対照も時間経過（1h, 3h、6h、24h, 48h, 72h, 5day, 7day）で8グループに分ける。光学顕微鏡、電子顕微鏡にて中耳粘膜肥厚の程度を観察する。Western blotting法及び免疫組織化学法によりp38, phosphorylated p38の発現を確認する。
２）急性中耳炎を発症させたC57BL/6マウスにp38binhibitorを点耳薬として一日二回投与する。時間経過（1h, 3h、6h、24h, 48, 72h, 5day, 7day）で8グループに分けた中耳粘膜を摘出して試料とする。組織は-８０℃に保存し、一部はパラホルムアルデハイドで固定し、OCT compoundで包埋する。もう一方はグルタールアルデハイドで固定し、エポンに包埋する。それぞれの標本を光学顕微鏡、電子顕微鏡で解析する。中耳粘膜肥厚の阻害を経時的に確認する。