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2014 Fiscal Year Research-status Report

房水流出路の4次元イメージングと緑内障病態における動的変化に関する研究

Research Project

Project/Area Number 26462664
Research InstitutionKumamoto University

Principal Investigator

井上 俊洋  熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (00317025)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 谷原 秀信  熊本大学, 生命科学研究部, 教授 (60217148)
Project Period (FY) 2014-04-01 – 2017-03-31
Keywords線維柱帯 / 房水流出路 / ライブイメージング
Outline of Annual Research Achievements

2光子顕微鏡撮影の、組織毒性が弱く深達度が高いという特性を生かし、さらにSHGによるコラーゲン線維の可視化を組み合わせて4次元イメージングを行った。ラットの摘出眼の前房にマイクロニードルを刺入し、緑色の蛍光色素を定圧で灌流した。角膜および結膜上皮はHoechstによって核染色をおこなった。これを2光子顕微鏡にセットし角膜輪部付近の撮影を行ったところ、緑色に染まる前房とシュレム管と思われる部位を確認することが出来た。また強膜のコラーゲン線維も観察可能であった。しかしながら蛍光のみを映し出すモニターの断面図からシュレム管と思われる部位を同定することは困難で、得られた画像も詳細な解析が可能なレベルには至っていなかった。蛍光試薬濃度、励起光の強さ、対物レンズの種類等の調節によってノイズ/シグナル比のより低い条件を検討したが、現在までのところ、改善にいたっていない。一方で、線維柱帯細胞の機能を視覚化するため、2つの実験系を立ち上げた。一つは線維柱帯細胞にGFPラベルしたアクチンを導入し、タイムラプス顕微鏡を用いてライブイメージングをこころみた。その結果、細胞運動と連動したアクチンを生細胞で観察することに成功した。また、線維柱帯細胞の貪食能を評価するために、蛍光ビーズを培地に加え、貪食されたビーズをオートカウンターで定量することができた。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

2光子顕微鏡を用いたイメージングはやや遅れている一方で、線維柱帯細胞の機能を評価する面では当初予定を超えて発展している。これにより、全体としては、おおむね順調に進展していると判断した。

Strategy for Future Research Activity

線維柱帯細胞にGFPラベルしたアクチンを導入し、タイムラプス顕微鏡を用いてライブイメージング技術を用いて、近年臨床応用されたRhoキナーゼ阻害剤の効果を確認する。Rhoキナーゼ阻害剤はアクチンを脱重合かさせ、眼圧を下降させることが分かっているが、ライブイメージングで細胞動態を検討した報告はない。また、同手法を用いて、ステロイド緑内障の原因薬剤の一つであるデキサメサゾンがアクチン細胞骨格に与える影響と、これに伴う機能変化を検討する。これまでの報告で、デキサメサゾン処理にによってアクチンにcross-linked actin networkを呼ばれる構造変化が生じることが分かっている。この変化が細胞遊走に与える影響を検討する。また、線維柱帯細胞の貪食能を評価するために、蛍光ビーズとオートカウンターを用いた評価系を確立したが、ライブイメージングと組み合わせることで、アクチン細胞骨格の変化と貪食能をリアルタイムで観察し、薬剤等の影響を評価することをこころみる。

  • Research Products

    (12 results)

All 2014 Other

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 4 results,  Open Access: 3 results) Presentation (7 results) (of which Invited: 5 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Epithelial mesenchymal transition-like phenomenon in trabecular meshwork cells.2014

    • Author(s)
      Takahashi E, Inoue T, Fujimoto T, Kojima S, Tanihara H.
    • Journal Title

      Experimental Eye Research

      Volume: 118 Pages: 72-79

    • DOI

      10.1016/j.exer.2013.11.014.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Tear fluid signs associated with filtration blebs, as demonstrated by three-dimensional anterior segment optical coherence tomography.2014

    • Author(s)
      Kojima S, Inoue T*, Kawaji T, Tanihara H.
    • Journal Title

      Clinical Ophthalmology

      Volume: 8 Pages: 767-772

    • DOI

      10.2147/OPTH.S59778.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Fornix-based versus limbal-based conjunctival flaps in trabeculectomy with mitomycin C in high-risk patients.2014

    • Author(s)
      Kuroda U, Inoue T, Awai-Kasaoka N, Shobayashi K, Kojima S, Tanihara H.
    • Journal Title

      Clinical Ophthalmology

      Volume: 8 Pages: 949-954

    • DOI

      10.2147/OPTH.S61342.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Long-term outcomes and complications of trabeculectomy for secondary glaucoma in patients with familial amyloidotic polyneuropathy.2014

    • Author(s)
      Kawaji T, Inoue T, Hara R, Eiki D, Ando Y, Tanihara H.
    • Journal Title

      PLoS One

      Volume: 9 Pages: e96324

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0096324.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] 濾過胞内部の変化2014

    • Author(s)
      第68回日本臨床眼科学会
    • Organizer
      第68回日本臨床眼科学会
    • Place of Presentation
      神奈川
    • Year and Date
      2014-11-13 – 2014-11-16
    • Invited
  • [Presentation] 緑内障術後房水流出路における形態変化2014

    • Author(s)
      井上俊洋
    • Organizer
      第46回日本臨床分子形態学会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2014-10-17 – 2014-10-18
    • Invited
  • [Presentation] ブレブ構造変化を捉える2014

    • Author(s)
      井上俊洋
    • Organizer
      第25回日本緑内障学会
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      2014-09-19 – 2014-09-21
    • Invited
  • [Presentation] Effect of Inflammatory Cytokines on Aqueous Outflow.2014

    • Author(s)
      Inoue T.
    • Organizer
      XXI International Society for Eye Research Biennial Meeting
    • Place of Presentation
      San Francisco, USA
    • Year and Date
      2014-07-20 – 2014-07-24
    • Invited
  • [Presentation] Prospective investigation of filtering bleb by three-dimensional anterior-segment optical coherence tomography.2014

    • Author(s)
      Inoue T, Kojima S, Fukushima A, Nakashima K, Tanihara H.
    • Organizer
      European Glaucoma Society 2014
    • Place of Presentation
      Nice, France
    • Year and Date
      2014-06-07 – 2014-06-11
  • [Presentation] Prospective assessment of filtration openings on the scleral flap by 3D AS-OCT.2014

    • Author(s)
      Inoue T.
    • Organizer
      The 4th English Glaucoma Academy
    • Place of Presentation
      Pyeongchang, Korea)
    • Year and Date
      2014-05-24 – 2014-05-25
    • Invited
  • [Presentation] Prospective investigation of filtering bleb by three-dimensional anterior-segment optical coherence tomography.2014

    • Author(s)
      Inoue T, Kojima S, Fukushima A, Nakashima K, Tanihara H.
    • Organizer
      The Annual Meeting of the Association for Research in Vision and Ophthalmology
    • Place of Presentation
      Orlando, USA
    • Year and Date
      2014-05-04 – 2014-05-08
  • [Remarks] 緑内障手術の謎を解明する、創薬研究へのチャレンジ

    • URL

      http://www2.kuh.kumamoto-u.ac.jp/ganka/kyousitu/naiyou/ryokunaisho.html

URL: 

Published: 2016-05-27  

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