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2015 Fiscal Year Research-status Report

脂質分解酵素による眼内浄化機構の解明

Research Project

Project/Area Number 26462665
Research InstitutionSapporo Medical University

Principal Investigator

平岡 美紀  札幌医科大学, 医学部, 講師 (80246983)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 大黒 浩  札幌医科大学, 医学部, 教授 (30203748)
吉田 香織  札幌医科大学, 医学部, 助教 (40596160) [Withdrawn]
阿部 晃  札幌医科大学, 医学部, 講師 (70136927)
Project Period (FY) 2014-04-01 – 2017-03-31
Keywords眼内炎症 / 自己免疫性 / リソゾーム / ホスホリパーゼA2 / 酸化リン脂質 / ルイスラット / ぶどう膜炎
Outline of Annual Research Achievements

平成27年度の研究実施計画では、動物モデルを用いて自己免疫性眼内炎症における房水中のリソゾームホスホリパーゼA2(LPLA2)のリ ン脂質代謝への関与を調べることであった。
そこで、ルイスラットに網膜抗原とフロイトアジュバンドの懸濁液にて免疫し、実験的自己免疫性ぶどう膜炎(EAU)を起こし、その際の眼内タンパク量・LPLA2活性の経時的な変化と炎 症との相関を検討した。その結果、ルイスラットのEAUモデルでは、ぶどう膜炎惹起前に比べ、惹起2週後には房水中のタンパク量が最大になり、惹起4週後ではほぼ惹起前の量に戻る。このことは、既報の ように惹起2週後をピークとした眼内炎症が起こったことが確認できた。また、惹起前・惹起後1、2、3、4週後の房水および血清 を採取し、LPLA2活性を比較した結果、房水中のLPLA2活性は眼内炎症と呼応して増減がみられたが、血清のLPLA2活性は眼内炎症の影響を受けなかった。このことは、眼内炎症に伴って房水中のLPLA2活性が上昇したことが明らかになった。また、同じモデ ルを用いて眼球の免疫組織学的検討を行ったところ、EAU惹起前にはLPLA2タンパクの発現はみられなかったが、惹起2週後の炎症 極期の眼球では前房内及び硝子体内に浸潤した細胞、特にマクロファージにLPLA2タンパクの発現がみられた。さらに酸化リン脂質に対する抗体を用いて免疫染色を行ったところ、眼内炎症に伴って前房内及び硝子体内に浸潤したマクロファージに酸化リン脂質の発現がみられた。この結果から、眼内炎症において眼内に浸潤したマクロファージによって房水中のLPLA2活性が増強し 、眼内炎症によって増えた房水中の細胞断片などが貪食細胞で消化・分解される際に細胞断片の成分 であるリン脂質の分解にLPLA2が作用していることが示された。さらに眼内炎症に伴って増えた酸化ストレスによって生じた酸化リン脂質の動向もLPLA2の発現と呼応していることが示された。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

自己免疫性ぶどう膜炎のラットモデルを用いた検討は予定通り進行しており、さらに眼内炎症における酸化リン脂質の動向についても明らかにすることができた。これまで、眼内炎症における酸化ストレスの増減の報告はいくつかある。しかし国内外を問わず、眼内炎症における酸化リン脂質について検討した報告はない。また急性炎症における酸化リン脂質の関与については、肺炎モデルのものが少数あるだけで、他の臓器での炎症に伴う酸化リン脂質の検討はされていない。今回得られたデータは眼内炎症での酸化ストレスの増強に伴う酸化リン脂質の発現を示した初めてのものである。

Strategy for Future Research Activity

28年度以降の計画としては、まず眼内炎症に伴って活発化する房水浄化機構におけるLPLA2の役割を明らかにする目的で、エンドトキ シン誘発ぶどう膜炎(EIU)モデルを用いて、LPLA2 活性を阻害した時の、炎症の推移と眼内のリン脂質消化への影 響を生化学的、組織学的に検討する。 そのためにLPLA2欠損マウスをもちいてエンドトキシン誘発ぶどう膜炎(EIU)を起こした時のぶどう膜炎惹起前、惹起後炎症初期(12 時間後)、惹起後炎症極期(24 時 間後)、消炎後期(48 時間後)について、各群それぞれの眼球を摘出し、検体の組織学的 検討を行う。とくに炎症の程度と脂質の貯留について、リン脂質、酸化リン脂質に対する抗体を用いた染色を行う。また貪食細胞のマーカーとLPLA2 の抗体を用いて二重染色を行 い、その分布を比較する。一方、生化学的検討として、それぞれの眼組織の部位別にリン脂質の量を定量する。これにより、炎症およ び消炎期でのリン脂質代謝におけるLPLA2 の役割を解明することができる。

Causes of Carryover

米国ミシガン大学からLPLA2欠損マウスを移入する予定であったが、相手方機関の手続きの関係で、H27年度中の移入ができなかった。LPLA2欠損マウスは日本国内移入後にSPF化をする必要があり、その後、当大学に移入される予定である。米国からの移送費用とSPF化の費用分が余剰分となった。

Expenditure Plan for Carryover Budget

現在、米国ミシガン大学からLPLA2欠損マウスを移入するための手続きを行っており、H27年度の余剰分は米国からの移送費用とSPF化の費用として使用予定である。

  • Research Products

    (7 results)

All 2016 2015 Other

All Int'l Joint Research (1 results) Journal Article (2 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results,  Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 1 results) Presentation (4 results)

  • [Int'l Joint Research] University of Michigan(米国)

    • Country Name
      U.S.A.
    • Counterpart Institution
      University of Michigan
  • [Journal Article] Effect of Antiglaucoma Medicine on Intraocular  Pressure in DBA/2J Mice.2016

    • Author(s)
      Sawada K, Hiraoka M, Ohguro H.
    • Journal Title

      Ophthalmic Research

      Volume: 55 Pages: 205-211

    • DOI

      10.1159/000444057

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Augmentation of Lysosomal Phospholipase A2 Activity in the Anterior Chamber in Glaucoma.2015

    • Author(s)
      Hiraoka M, Abe A, Inatomi S, Sawada K, Ohguro H.
    • Journal Title

      Current Eye Research

      Volume: 19 Pages: 1-6

    • DOI

      10.3109/02713683.2015.1056800

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Presentation] 新しい評価法を用いた前部強膜炎の病態解析の検討2015

    • Author(s)
      平岡美紀、青木悠、大黒浩
    • Organizer
      第69回日本臨床眼科学会
    • Place of Presentation
      名古屋国際会議場
    • Year and Date
      2015-10-22 – 2015-10-25
  • [Presentation] 蛍光標識したラテックスビーズを用いた豚眼の線維柱帯細胞の貪食能評価2015

    • Author(s)
      平岡美紀、阿部晃、大黒浩
    • Organizer
      第119回日本眼科学会総会
    • Place of Presentation
      さっぽろ芸術文化の館
    • Year and Date
      2015-04-16 – 2015-04-19
  • [Presentation] マウスぶどう膜炎モデル(EIU)におけるリソソームホスホリパーゼA2(LPLA2) の関与2015

    • Author(s)
      澤田奏子、阿部晃、平岡美紀、James A. Shayman、Robert Kelly、大黒浩
    • Organizer
      第119回日本眼科学会総会
    • Place of Presentation
      さっぽろ芸術文化の館
    • Year and Date
      2015-04-16 – 2015-04-19
  • [Presentation] 実験的自己免疫性ぶどう膜炎モデルラットにおけるリソソームホスホリパーゼA2 (LPLA2)の役割2015

    • Author(s)
      大川映、Anton Lennikov、平岡美紀、,阿部晃、大黒浩
    • Organizer
      第119回日本眼科学会総会
    • Place of Presentation
      ロイトン札幌
    • Year and Date
      2015-04-16 – 2015-04-19

URL: 

Published: 2017-01-06   Modified: 2022-01-27  

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