可溶性ULPB2制御による新しい敗血症治療法の開発

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 26462755
• Research Institution: Tottori University
• Principal Investigator: 千酌 浩樹 鳥取大学, 医学部附属病院, 教授 (90283994)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 清水 英治 鳥取大学, 医学部, 教授 (50187449) ; 高田 美也子 鳥取大学, 医学部, 研究員 (50523643)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 敗血症 / 免疫療法 / NK細胞 / ULBP2

Outline of Annual Research Achievements

敗血症は感染によって発症した全身性の炎症反応症候群であり、病原細菌に対する過剰あるいは抑制された免疫反応が死亡要因となっていることが知られている。NK細胞はこの自然免疫を調節する中心細胞であり、敗血症における機能異常が報告されているが、その機序の解明とこれを利用した敗血症治療方法の開発はいまだ行われてはいない。我々はこれまで感染時・腫瘍化等の生体ストレス時に宿主細胞上に発現する分子ULBP2に関する研究を遂行してきた。この過程でULBP2は細胞表面上にあってはNK細胞を活性化するが、可溶化すると逆に抑制することを明らかにしている。このことからULBP2可溶化を制御することによりNK細胞機能を調節する新しい敗血症治療方法を開発することを目的として本研究を行った。
平成27年度は、以下の2方面から検討を行った。①敗血症in vitroモデルを用いて、敗血症時にULBP2や平成26年度研究で切断酵素と同定したADAMプロテアーゼがどのような動態をとるかの検討：ヒトPBMCを採取し、LPSで刺激を行った後、NK細胞をMACSシステムで分離し、RNAを抽出した。LPS刺激無しのコントロールNK細胞RNAとともに次世代シークエンサーHiSeq2500によるトランスクリプトオーム解析を実行した。RNA量、品質確認とも問題なく、現在データ解析中である。本解析により、ULBP2を含むNK細胞表面分子群と、その切断酵素群の敗血症時の動態が明らかになり、敗血症治療バイオマーカーや治療ターゲットが明らかになると考えられる。②切断点解析：ULBP2切断点を明らかにするために、可溶性ULBP2を濃縮し、糖鎖処理後、SDS page、銀染色によるバンド同定、ペプチドシークエンスをすすめている。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

ULBP2やその切断酵素（ADAMプロテアーゼ）単独を標的とするのみならず、世代シークエンサーを使った、in vitro 敗血症モデルにおける、NK細胞全遺伝子トランスクリプトオーム解析を本年度導入している。ULBP2可溶化が、多くの分子の強調によるものである場合も本手法により統合的にとらえることができ、本研究テーマである可溶性ULBP2制御による敗血症免疫療法の開発にむけて、きわめて有望な進歩をしたと考えられる。

Strategy for Future Research Activity

引き続き、プロテアーゼによるULBP2切断点の同定を平成28年度に行うと共に、平成27年度の敗血症時NK細胞トランスクリプトオーム解析より明らかになった、敗血症時に病態に関与すると考えられれる、NK細胞上分子群、プロテアーゼ群についても基礎的検討を継続する。

Causes of Carryover

プロテアーゼによるULBP2切断点の同定は、引き続き継続する必要がある。このために本同定にかかる費用が次年度使用額として生じた。

Expenditure Plan for Carryover Budget

プロテアーゼによるULBP2切断点の同定に使用する。