2016 Fiscal Year Annual Research Report
Resolution of Oral Biofilme Formation at Early Stage
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26462793
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| Research Institution | Health Sciences University of Hokkaido |
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Principal Investigator |
中澤 太 北海道医療大学, 歯学部, 教授 (60115053)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宮川 博史 北海道医療大学, 歯学部, 講師 (30219729)
藤田 真理 北海道医療大学, 歯学部, 助教 (50405669)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 口腔バイオフィルム / Veillonella / メタゲノム解析 / 唾液の細菌叢 / rpo B / 新菌種 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１．学童の口腔内診査を行い、清掃状態によってgood, moderate, poorの３群に分類し、得られた唾液のマイクロバイオームを、メタゲノム解析を行った。その結果、口腔清掃状態の悪化に伴ってStreptococcus属細菌の割合が減少し、偏性嫌気性のVeillonella属細菌の割合が増加した。
２．各唾液試料をBHI寒天培地とrogosa寒天培地に播種し、それぞれのCFUを計測した。更に、rogosa寒天培地に生育した株は、グラム染色とVeillonellaのgenus specific primerを用いたPCRによってVeillonella属細菌であることを確認した。その結果、上記と同様に口腔清掃状態の悪化に伴ってVeillonella属細菌の割合が増加することが確認された。
３．合計1609株のVeillonella属細菌が分離された。rpo B geneの塩基配列から設計したSpecies specific primerを応用したPCR法を用いて、この1609株をspeciesレベルで同定した。その結果、1609株中167株が既報のVeillonella属細菌種には分類されないUnknown-Veillonella isolateであることは判明した。このUnknown-Veillonella isolateの分離頻度は、口腔清掃状態の悪いpoor群で、最も高かった。
４．Unknown-Veillonella isolateの遺伝学的系統分類を行うために、167株から28株を抽出し、それらのrpo B geneの塩基配列を解析した。その塩基配列を用いて、NJ法によるevolutionary treeを構築した。その結果、Unknown-Veillonella isolateには遺伝学的多様性が認められると同時に、既報の菌種とは異なる新菌種の存在が示唆された。
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