2014 Fiscal Year Research-status Report
歯髄血管新生過程におけるTPO/MPLシグナル制御機構の時空的解析
| Project/Area Number |
26462800
|
|---|
| Research Institution | The Nippon Dental University |
|---|
Principal Investigator |
春原 正隆 日本歯科大学, 生命歯学部, 准教授 (70287770)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森川 茂 国立感染症研究所, 獣医科学部, 部長 (00167686)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2019-03-31
|
| Keywords | 胎生期 / 歯胚 / 血管 / 歯髄 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
血管新生過程においては、血管新生ニッチ形成も含め、各組織ごとに内皮細胞、壁細胞の分化・成熟が時間的・空間的に制御されることか予想される。そこで、歯胚領域血管新生過程における血管内皮細胞および壁細胞間相互作用の分子メカニズムを解明することは歯の再生医療実現に向け急務であると考えられる。近年、血小板造血機構が血管新生に関与しているとの報告もあり、歯胚発生過程における血管新生の分化制御機構の解明は、歯髄再生医療具現化の基盤となる重要な情報を提供するものと考えられる。
本年度は、血管新生に関与することが予想される Flk1(VEGF-R2), Tie-2遺伝子に着目し、血管新生過程における経時的遺伝子発現パターンをin situ hybridization法を用いて詳細に解析を行い、Flk1(VEGF-R2), Tie-2遺伝子が胎生12.5日から18.5日齢のマウス胎児において、時期特異的、部位特異的に明瞭に発現していることが確認された。
今後歯胚領域において血管新生に関与する可能性が高い他の遺伝子に関しても経時的発現状況を詳細に検討し、血管新生因子発現に関与する一連の遺伝子の同定および各遺伝子分子間相互作用の分子メカニズムを解明することにより、血管内皮細胞、壁細胞の分化・成熟に関する時間的・空間的制御機構の解明を行ってまいりたいと考えております。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度は血管新生に関与すると予想される４遺伝子についてin situ hybridization法を用いて胎生期における経時的遺伝子発現状況の解析を行う予定でありましたが、解析にあたり、本実験系で正常にworkするベストのプローブの選定に予想以上の時間を要したこと、さらには上顎・下顎の歯胚を同一切片上で揃えた切片を準備することは極めて困難であったためin situ hybridizationの実験遂行に必要な切片の枚数確保にかなりの時間を要したこともあり、本年度は２遺伝子に関してのみ経時的遺伝子発現状況の解析を終了したという結果にとどまりました。
従いまして、「研究の目的」の達成度に関しましては「やや遅れている」と報告させて頂きたいと存じます。
|
| Strategy for Future Research Activity |
次年度以降は血管新生に関与する可能性のある残りの２遺伝子に関して正常にworkするベストのプローブの選定後、早急にin situ hybridization法を用いて歯胚領域における経時的遺伝子発現状況の解析を詳細に行なう予定である。
また胎生期における上記遺伝子の経時的遺伝子発現状況の解析結果をふまえて、我々が既に解析を終えているの血管新生に関与することが予想される各種遺伝子との関連、さらにはTPO/MPLシグナルとのクロストークの可能性の有無に関しても詳細に検討してまいりたいと考えております。
他方、血管内皮細胞の増殖シグナルにはPKCの活性化が必須であるとの報告もあることから、in situ hybridization法および免疫染色法により、各種PKC-isoformおよびPKC-isoform 発現に関与するWntシグナル経路の同定を行い、これまで解析済みの血管新生に関与することが予想される各種遺伝子との関連について検証を行うとともに、血管内皮細胞・血管壁細胞の増殖・分化制御機構におけるPKAを介したVEGFシグナル増強の可能性の有無に関しても経時的に解析を行いたいと考えております。
本研究により、歯胚領域における高次血管構築制御機構の基盤となる分子機構解明の一助となることが期待されると考えられる。
|
