2015 Fiscal Year Research-status Report
歯髄血管新生過程におけるTPO/MPLシグナル制御機構の時空的解析
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26462800
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| Research Institution | The Nippon Dental University |
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Principal Investigator |
春原 正隆 日本歯科大学, 生命歯学部, 准教授 (70287770)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森川 茂 国立感染症研究所, その他部局等, その他 (00167686)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 胎生期 / 歯胚 / 血管 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
歯胚発生は、口腔上皮と神経堤由来間葉組織の相互作用により開始される。生体の様々な組織においては「幹細胞」の存在が既に確認されているが、歯髄形成能を有する幹細胞の分化制御機構を解明するには至っていない。
一方、血管新生過程においては、血管新生ニッチ形成も含め、各組織ごとに内皮細胞、壁細胞の分化・成熟が時間的・空間的に制御されることか予想される。従って歯胚領域血管新生過程における血管内皮細胞および壁細胞間相互作用の分子メカニズムを解明することは歯の再生医療実現に向け急務であると考えられる。近年血小板造血機構が血管新生に関与しているとの報告もあり、歯胚発生過程における血管新生の分化制御機構の解明は、歯髄再生医療具現化の基盤となる重要な情報を提供するものと考えられる。
本年度は血管新生に関与することが予想される遺伝子のうち各種angiopoietin1遺伝子に着目し、血管新生過程における経時的遺伝子発現パターンをin situ hybridization法を用いて詳細に解析を行った結果、歯胚発生過程において、エナメル器、歯乳頭、歯胚周辺部間葉細胞において、時期特異的、部位特異的発現が認められた。さらに、既に解析済みであるFlk1(VEGF-R2), Tie-2遺伝子の経時的発現状況と比較検討を行い相互間の発現状況の解析も同時に行った。
今後歯胚領域において血管新生に関与する可能性が高い他の遺伝子に関しても経時的発現状況を詳細に検討し、血管新生因子発現に関与する一連の遺伝子の同定および各種遺伝子相互作用の分子メカニズムを解明することにより、血管内皮細胞・壁細胞の分化・成熟に関する時間的・空間的制御機構の解明を行ってまいりたいと考えております。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度は血管新生に関与することが予想される各種遺伝子のうちangiopoietin遺伝子を中心にin situ hybridization法を用いて胎生期における経時的遺伝子発現状況の解析を行う予定でありましたが、解析するにあたり、本実験系で正常にworkするベストのプローブの選定に予想以上の時間を要したこと、さらには上顎・下顎の歯胚を同一切片上で揃えた切片を準備することが切片の枚数的に極めて困難であったこともあり、in situ hybridization法を用いた実験遂行に必要な切片の枚数確保にかなりの時間と労力を要する結果となりました。本年度に関しましては、各種angiopoietin遺伝子のうち、angiopoietin1遺伝子に関してのみ経時的遺伝子発現状況の解析を終了したという結果となりました。
従いまして、「研究の目的」の達成度に関しましては「やや遅れている」と報告させて頂きたいと存じます。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度以降は他種angiopoietin遺伝子を含め、血管新生に関与する可能性のある各種遺伝子に関して正常にworkするベストのプローブの選定後早急にin situ hybridization法を用いて歯胚領域における経時的遺伝子発現状況の解析を詳細に行なう予定でございます。また胎生期における上記遺伝子の経時的遺伝子発現状況の解析結果をふまえて、我々が既に解析を終えているの血管新生に関与することが予想される各種遺伝子との相関、さらにはTPO/MPLシグナルとのクロストークの可能性の有無に関しても詳細に検討してまいりたいと考えております。
他方、血管内皮細胞増殖シグナルにはPKCの活性化が必須であるとの報告もあることから、in situ hybridization法および免疫染色法により、各種PKC-isoformおよびPKC-isoform 発現に関与するWntシグナル経路の同定を行い、これまで解析済みの血管新生に関与することが予想される各種遺伝子との関連についても検証を行うとともに、血管内皮細胞・血管壁細胞の増殖・分化制御機構におけるPKAを介したVEGFシグナル増強の可能性の有無に関しても経時的に解析を行ってまいりたいと考えております。
本研究は、歯胚領域における高次血管構築制御機構の基盤となる分子機構解明の一助となることが期待されるものと考えられます。
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| Causes of Carryover |
ISH用パラフィン切片を注文した際に、ISH用パラフィン切片作製時使用したスライドグラスの枚数が予定より少なくてすみましたもので２００円が残金となり次年度使用額生じた次第でございます。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度分に２００円繰越して、平成２８年度分として請求した予算と合わせて使用させて頂けましたら幸いでございます。
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Research Products
(3 results)
