2014 Fiscal Year Research-status Report
間葉系幹細胞が支持する破骨細胞前駆細胞ニッチの解析
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26462826
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| Research Institution | Matsumoto Dental University |
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Principal Investigator |
溝口 利英 松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 講師 (90329475)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小林 泰浩 松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 教授 (20264252)
中道 裕子 松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 講師 (20350829)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 破骨細胞 / 破骨細胞前駆細胞 / 骨髄間葉系幹細胞 / M-CSF / c-Fms / ニッチ / 細胞周期 / QOP |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々は、in vivoにおける破骨細胞は(1) 細胞増殖が停止した破骨細胞前駆細胞(QOP)から分化すること (2) QOPは、M-CSF依存的に形成されることを明らかにした。以上は、M−CSFの発現を介して、QOPの形成を支持する微小環境(ニッチ)の存在が予想される。我々は間葉系幹細胞がニッチとして機能することを予想している。本年度は①QOPのFACS解析系の構築、②間葉系幹細胞に特異的に働くCreマウスの探索を行った。
【QOPのFACS解析系の構築】QOPは静止状態でM-CSFの受容体(c-Fms)を発現することが予想される。また、これまでの研究結果より、Gr1が陰性であることが示唆された。そこでマウスの骨髄中におけるc-Fms陽性Gr1陰性Ki67陰性の細胞集団をFACSにより検出した。その結果、骨髄中の約1%の細胞がc-Fms陽性Gr1陰性Ki67陰性の細胞として認められた。この細胞集団における表面マーカーをさらに解析した。その結果、CD11bおよびF480が陽性であることが明らかになった。
【間葉系幹細胞に特異的に働くCreマウスの探索】以前我々は、Leptin受容体プロモーターの下流でCreリコンビナーゼを発現する遺伝子 (LepR-cre) と、Tomato蛍光色素をCre依存的に発現するレポーター遺伝子(flox-stop-flox-Tomato)を有するダブルトランスジェニックマウスの骨髄組織を観察した。その結果、3週齢では骨髄細胞のみが15週齢では骨髄細胞および骨形成細胞がTomato陽性細胞として認められた。平成２６年度は、骨髄細胞と骨芽細胞をFACS解析にて区別するためにLepR-cre/Tomato/Col1-GFP(骨芽細胞特異的にGFPが発現)トリプルトランスジェニックマウスを作成した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成２６年度は「破骨細胞前駆細胞(QOP)ニッチのin vivo解析系の構築」を目的とした。「QOPのFACS解析系の構築」および「間葉系幹細胞得意的な分子の探索」を目標に研究計画を立てた。①「QOPのFACS解析系の構築」については、FACSによりQOPの細胞集団と予想される画分を検出することに成功しており、ほぼ予定通りに進行している。②「間葉系幹細胞得意的な分子の探索」については、解析に使用するLepR-cre/Tomato/Col1-GFPトリプルトランスジェニックマウスを作成したところである。当初の予定より遅れているが、今後の解析には時間は要さないと予想している。このマウスの解析を進め、間葉系幹細胞の特異的な分子を探索する。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成２６年度に引き続き、間葉系幹細胞に特異的に発現する分子を検索する。間葉系幹細胞を得意的に抑制し、破骨前駆細胞(QOP)および破骨細胞に対する影響を調べる。抑制にはCre誘導性に発現するジフテリアトキシン(DT)受容体 (flox-stop-flox-DTR)を用いる。また、 間葉系幹細胞得意的にM-CSF発現を抑制し、破骨前駆細胞(QOP)および破骨細胞に対する影響を調べる。M-CSF-flox/floxはDr. Abbound Werner S. (デキサス大学)に供与を依頼する予定である。
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| Causes of Carryover |
消耗品が割引価格で購入できたため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
研究記録を記入するための筆記用具を購入する。
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